Hvad får antistoffer til at forblive i nitrocellulose membran lateral flow assay?
Nitrocellulose membran i Lateral flow Assay kommer efter prøven og konjugeret pad. Nitrocellulosemembran kaldes også substratmembran, og den er en af de mest afgørende og følsomme dele i forhold til resultaterne af testen udført på Lateral flow -analyse. I Lateral Flow Assay kan der være forskellige materialer, der bruges, såsom celluloseacetat, polyvinylidenfluorid (PVDF), ladningsmodificeret nylon og polyethersulfon (PES) osv. I nitrocellulosemembranen er der forskellig porestørrelse, porøsitet, tykkelse , og kemisk behandling. Nitrocellulosemembraner har ikke en lige fordeling af porer, derfor er kapillærstrømningstiden mere foretrukket. Inden vi går videre ind i begrundelsen, er det vigtigt at vide om kapillærstrømmen. Grundlæggende måles kapillær strømningstid i sekunder eller centimeter, og det er den samlede tid, som prøven tog for at blive fuldstændigt fyldt i teststrimlen eller lateralflowanalyseenheden.
Nitrocellulosemembran fungerer som et bærelegeme for antistofferne på anordningen til lateral flowanalyse. De bruges også til screening af forskellige processer og typer af antistoffer, dvs. monoklonale, og dette sker som følge af modifikationen af enzymoimmounoassayet.
På nitrocellulosemembran, forbliver antistofferne og konjugerer med de biologiske partikler enten latex- eller guldpartikler. Antistofferne må ikke bevæge sig og immobiliseres på nitrocellulosemembranen af forskellige årsager. Da der er testlinjer og kontrollinjer på det laterale flowassay, sidder antistofferne fast mellem disse to linjer. I betragtning af testlinjen bruges den til at binde prøveproteinet, mens kontrollinjen har de artsspecifikke antistoffer, der bruges til yderligere at påvise antistofferne i prøven. En anden grund til, at antistofferne forbliver på nitrocellulosemembranen, er bagfilmens porestørrelse. Den ikke-porøse bagfilm af nitrocellulosemembranen lader ikke antistofferne glide af, de håndteres tæt og forbliver dermed på membranen. Dette hjælper også med at reducere variationen.
Andre vigtige faktorer, der får antistofferne til at forblive på nitrocellulosemembranen, er valget af antistoffortyndingsmiddel, tørringsmetode, koncentrationen af capture-antistoffer og reagensdispenseringshastigheden. Korrekt tørring er nødvendig for at sikre, at capture-antistofferne fæstner sig til membranen; ikke desto mindre tager det betydeligt længere tid for membraner med bagside at tørre sammenlignet med membraner uden bagside. Udover kompleksiteten, brugerbekymringer, prøveforberedelse, vedligeholdelse, reproducerbarhed og brugervenlig fortolkning af resultater, bør det altid sikres, at specificerede parametre er følsomme. Nogle af disse standarder, såsom resultatfortolkning og følsomhed, kan i høj grad tilskrives detektionsmidlernes immobilisering og rumlige retention i forhold til parametrene i testområdet.
En anden tilgang, der er nyttig til at få antistoffer til at blive på nitrocellulosemembranen, er den kovalente binding af antistofferne til membranen i Lateral Flow Assay. Den ikke-kovalente immobilisering af antistofferne på nitrocellulosemembranen i LFA antyder også nitrocellulosemembranernes meget stærke kapacitet til at binde antistoffer til den. Som før nævnt er der i Lateral Flow Assay partikler, der er følsomme og afgørende for test af prøven. Ved at forbinde dette med de kolloidale guldpartikler har de vist sig at få antigenerne til at blive på cellulosemembranen. I denne proces er det første trin den passive adsorption af antistoffet, der kræves på overfladen af nanopartiklen af guldkolloidalt. Dette er en af de mest udfordrende i Lateral Flow Assay. Til dette formål er der blevet skabt konjugeringspartikler, der let får antistofferne, molekylerne og andre elementer til at blive på nitrocellulosemembranen.
Dette giver også let vedhæftning og belægning af antistofferne på overfladen, herunder andre analytter og endda biomolekyler. Bortset fra det er latexperlerne i det laterale flowassay også nyttige til at få antistoffer til at blive på nitrocellulosemembranen. Passiv konjugering kan også hjælpe med at få antistoffer til at forblive på nitrocellusemembranen i lateral flow assay -testen. Selvom disse processer og årsager kan få antistoffer til at forblive på nitrocellulosemembranen i Lateral Flow Assay, er de tidskrævende og meget lange processer Ikke kun dette, men det kræver også stort udstyr og andre ting, der gør det hektisk og meget kostbar. Nogle årsager kræver også en aktiv optimering af pH, og dette er en omfattende ting, derfor er nye metoder og processer blevet inkorporeret i Lateral Flow Assay -enheden, der fører til brug af andre metoder. Et par antistoffer er specifikt immobiliseret på nitrocellulose ved fysisk absorption. Med dybe rødder i forskningen kan antistofferne også blive på nitrocellulosemembranen på grund af den specifikke hydrofobe og dipolære interaktion mellem begge proteindomæner og nitrocellulose, hvilket resulterer i bevarelse af orienteringen af antistoffer.
Konklusion
For at afslutte og opsummere det i lyset af ovenstående beskrivelse er nitrocellulose en vigtig del af det laterale flowassay og den enhed, der bruges til testen. En af de vigtigste og vitale faktorer, der bestemmer Lateral Flow Assay og dets følsomhed, er substratmembranen eller Nitcocellulosemembran. Test- og kontrollinjerne trækkes over membranen for at sikre god binding og indfangning af antistofferne. Ikke-specifik adsorption på test- og kontrollinjerne kan påvirke resultaternes følsomhed, hvilket kan resultere i falske resultatværdier. Da nitrocellulose er en af delene af det laterale flowassay, hvorfra prøven føres. Fra prøven konjugerer antistofferne og antigene dele af både prøven og enheden med hinanden og videregives til den næste del. Derfra strømmer prøven til nitrocellulosemembranen, der følgelig optager de antistoffer og antigener, der kræves til testen. Egenskaberne og årsagerne til, at antigen forbliver på nitrocellulosemembranen, er blevet beskrevet i detaljen ovenfor og dækker således papirets emne.
Referencer
https://www.creative-diagnostics.com/Immunochromatography-guide.htm
https://fnkprddata.blob.core.windows.net/domestic/download/pdf/IBS_A_guide_to_lateral_flow_immunoassays.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6350463/
https://www.bakerlab.org/wp-content/uploads/2015/12/Holstien_Anal_Bioanal_Chem_2015.pdf
https://www.nature.com/articles/s41598-021-87072-7
https://www.researchgate.net/topic/Nitrocellulose