Hvad kan være årsagen til falske positive resultater i sidestrømsanalysen?
Lateral flow- assayet (LFA) er en veletableret platform til point-of-care (POC) testning, og årsagen er dens lave omkostninger og brugervenlighed. Konventionelle LFA'er giver kvalitative eller semi-kvantitative resultater og nødvendiggør brugen af specialiserede instrumenter til kvantitativ detektion. Lateral flow-assayet (LFA) er en papirbaseret platform til detektion og kvantificering af analytter i komplekse blandinger. Prøven placeres på en testenhed, og resultaterne vises inden for 5-30 minutter. På grund af de lave udviklingsomkostninger og den nemme produktion af LFA'er er deres anvendelser blevet udvidet til en bred vifte af felter, der kræver hurtig testning.
En flydende prøve, såsom blod, serum, plasma, urin, spyt eller opløste faste stoffer, tilsættes direkte til prøvepuden og ødelægges via den laterale strømningsindretning, der skal bruges. Prøvepuden neutraliserer prøven og filtrerer uønskede partikler ud som røde blodlegemer. Prøven kan derefter flyde frit til den konjugerede pude, som indeholder stærkt farvede eller fluorescerende nanopartikler med et antistof på deres overflade. Disse tørrede nanopartikler frigives og blandes med prøven, når væsken når konjugatpuden. Hvis antistoffet genkender målanalytikere i prøven, vil de binde til antistoffet.
Der har i den seneste tid været en stigende efterspørgsel efter multiple diagnostiske assays på plejestedet med omfattende testlinjer, der muliggør hurtig og samtidig detektion af flere analytter i point-of-care-prøver. Sådanne assays (potentielt en enkelt LFA) burde være enkle at udføre uden hjælp fra et laboratorium eller personer, der er uddannet i kemisk analyse. LFA'er er fremragende kandidater, fordi de er billige at producere, enkle at bruge og vigtigst af alt, bredt accepterede af brugere og regulerende myndigheder.
Selvom lateral flow assay er en gavnlig og den mest anvendte måde til test, er der dog nogle underskud og problemer set i Lateral flow Assay og resultaterne specifikt. Dette er et ofte stillet spørgsmål om, hvorfor de positive falske resultater i det laterale flowassay forekommer, og der er forskellige årsager til det afhængigt af videnskabens gren. Grunden til, at de falsk positive resultater kommer frem i Lateral Flow Assay, diskuteres imidlertid detaljeret i det følgende svar. Når en testlinje kan observeres i den manglende fuldstændige mangel på den ønskede analyt, kan et falsk positivt resultat skyldes en række faktorer, herunder uspecifik binding, krydsreaktivitet eller heterofile antistoffer.
For at optimere assayet og eliminere falske positive resultater er det nødvendigt at identificere, hvilke af disse faktorer eller kombinationer af faktorer, der forårsager et falsk positivt resultat. Ikke-specifik binding opstår, når der er en uspecifik vekselvirkning mellem antistof-nanopartikel-konjugatet og antistoffet ved testlinjen, uanset om målanalytten er til stede eller ej. Ikke-specifik binding kan ofte undgås ved blot at optimere konjugeringsproceduren for et specifikt protein. Optimering af antistoffet/proteinindlæsning (for lidt eller for meget antistof kan resultere i uspecifik binding), antistofinkubationstiden og reaktionsbufferen er alle aspekter af konjugeringsoptimering. Proteiner, overfladeaktive midler eller polymerer kan anvendes som blokeringsmidler i en teststrimmelkomponent (f.eks. Konjugatfortyndingsmiddel, forbehandling af prøvepude, forbehandling af konjugatpude, løbende buffer osv.). Krydsreaktivitet adskiller sig fra uspecifik binding ved, at den opstår, når antistoffet binder til en analyt i prøven, der IKKE er målanalyt. Dette er et vanskeligere problem at løse, og det kræver normalt udskiftning af antistofsystemer, der ikke krydsreagerer med uønskede analytter.
En prøve, der indeholder heterofile antistoffer (endogene antistoffer, der binder assay-antistoffer), kan give et falsk positivt resultat. Flere typer heterofile antistoffer kan ende med at forårsage tværbinding mellem antistoffet konjugeret til nanopartiklen og antistoffet ved testlinjen, selv når målanalytten ikke er til stede. Hvis det falsk positive resultat viser den samme signalintensitet, selv efter fortynding af prøven, snarere end et lineært fald i signalintensitet, kan det skyldes heterofile antistoffer. Humane antistoffer i en prøve, der interagerer med assay-antistoffer for at producere falsk positive eller falsk negative resultater, kaldes heterofile antistoffer. Det heterofile antistof kan udvikles hos en patient som følge af eksponering for specifikke dyr eller animalske produkter, infektion med bakterielle eller virale agenser eller ikke-specifikt. Et falsk positivt testresultat kan forekomme på flere punkter, på grund af dårlig testteknik fra den screenede (f.eks. tykt udstrygning på hæmokokultkort) og ugyldig testaflæsning. En forsinket aflæsning kan også resultere i et falsk positivt resultat, især når man bruger en latexagglutinationstest. Et falsk positivt resultat kan også skyldes fysiologisk blodtab hos en person, der ikke er inden for normalområdet.
Falsk-positive resultater kan forekomme som følge af homeostaseforstyrrelser (f.eks. ufuldstændig excisionsreparation, cellecyklusarrest, inflammation), der kan finde sted, før cellemembranerne er kompromitteret, og nekrose/apoptose kan detekteres ved histopatologi. Disse konsekvenser kan øge DNA-migrationen på kontaktstedet såvel som perifert i andre væv, efterhånden som vævet reagerer på celleskade, og den systemiske inflammatoriske respons udvikler sig, afhængigt af dosiskoncentrationen og administrationshyppigheden.
Konklusion
Lateral flow-analysen er enkel, let tilgængelig og økonomisk, men på grund af forskellige årsager, der er nævnt ovenfor, kan resultaterne nogle gange vise sig at være forkerte. LFA'ers særlige og exceptionelle egenskaber har hjulpet med at detektere sygdomsbiomarkører og infektiøse agenser inden for medicin, landbrug, fødevaresikkerhed og miljøsikkerhed. Selvom metodens princip har formået at forblive uændret i årtier, er LFA-teknikkerne blevet løbende forbedret, hvilket har resulteret i øget følsomhed og reproducerbarhed samt samtidig detektion af flere analytter. Det er vigtigt at bemærke, at disse analyser nu kan udføres uden for laboratoriet, hvilket giver betydelige fordele ved brug i udviklingslande og på point-of-care, uanset om det er i felten eller i mere konventionelle kliniske omgivelser. Selvom lateral flow-analysen kan vise falsk positive og omvendt resultater, kan andre metoder afprøves og testes for at opnå betryggende resultater.
Referencer
https://www.clinisciences.com/en/read/serological-tests-in-mycology-1190/lateral-flow-assay-lfa-2095.html
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0165993616300668
https://nanocomposix.com/pages/introduction-to-lateral-flow-rapid-test-diagnostics
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4986465/
https://www.abingdonhealth.com/services/what-is-lateral-flow-immunoassay/