Hvordan fungerer en sidestrømsanalyse?

Før vi går i dybden med Lateral Flow Assays funktion og funktionsprincipper, er det vigtigt at give en kort introduktion til Lateral Flow Assay . Lateral Flow Assay, eller immunokromatografi, bruges til at detektere tilstedeværelsen eller fraværet af analytter for at opnå de ønskede resultater. Hovedaktørerne i denne gruppe er antigen, antistofarter og prøven eller matrixen. Lateral Flow Assays bruges også til en række detektions- eller diagnostiske formål, såsom at detektere kræft ved hjælp af kræftmarkører, graviditet, påvisning af stofmisbrug eller overdosis, patogener, infektionssygdomme og også til hjertemarkører.

Lateral Flow Assay fungerer på fire måder. Først og fremmest er det en enhed, der har en prøvepude, en konjugatpude, en testlinje og en kontrollinje ( nitrocellulosestrimmel ). Hver del af denne enhed er adskilt af en lille afstand, der tillader en jævn strømning af prøven. Det første trin i brugen af ​​denne enhed er at placere prøven på enheden, der strømmer helt til den laterale flow-enhed. Når den er strømmet, finder filtreringsprocessen sted, hvor uønskede partikler neutraliseres eller filtreres. Inden for den givne varighed af Lateral Flow Assay-testen, finder hele processen sted, og resultaterne kan således ses. Når prøven når enhedens konjugatpude, blandes de tørrede partikler på puden med partiklerne i prøven.

Det næste trin, der sker, er strømmen af ​​analytbundne nanopartikler og adgang til kontrollinjerne, der yderligere fører til resultaterne. Prøven kan derefter begynde at flyde til den konjugerede pude, som indeholder stærkt farvede eller fluorescerende nanopartikler med et antistof på deres øverste lag. Der er også en transporterende pude, der fuldstændigt absorberer prøven eller prøvevæsken for at sikre, at der ikke er væske tilbage omkring test- og kontrollinjerne. Kontrollinjen i den laterale strømningsindretning, der er mærket som C, består af affinitetskirtler, der yderligere hjælper med at binde nanopartikelkonjugatet med eller uden tilstedeværelse af en analyt i opløsningen for at sikre, at assayet fungerer korrekt frem for ellers . Grundlæggende er metoden til testning af denne enhed baseret på aspekterne af antigen-antistofreaktion. Som det er nævnt ovenfor, kan de laterale flow-assay-tests give aflæsningen i to former enten kvalitativ eller semi-kvantitativ analyse.

Førte dem videre til den detaljerede forklaring, er det første trin i prøvepuden, som prøven flydes på og derefter absorberes. Der er en chance for, at filteret er på prøvepuden for at flyde den nøjagtige og nødvendige mængde af prøven. Den anden fase er på den konjugerede pude. Den konjugerede pude begynder at virke, efter at prøven er absorberet, og den har konjugerede mærker og antistoffer, der vil beregne, om analytterne er til stede i prøven eller ikke for bindingshændelserne. Efter disse to faser begynder arbejdet med nitrocellulosemembranen at fungere. På nitrocellulosemembranen vil analytterne eller antistofferne til stede i prøven og den konjugerede pude binde sammen med nitrocellulosepuden. Efter dette vil det gå videre til den absorberende pude, der hjælper med at absorbere en ekstra mængde prøve og producere resultaterne.

For at eksemplificere, hvordan Lateral Flow Assay-testen fungerer , kan der tages et eksempel på et antistof-hurtigtestkittet mod Covid-19. Når prøven eller præparatet tilsættes prøvepuden på lateral flow-assay-enheden, passerer den derefter gennem en film, der findes på enheden kaldet filterfilm. Når den er passeret, vil tilstedeværelsen eller fraværet af målanalytten blive testet, og om prøven har de ønskede analytter, vil den amalgamere med et antigen, der kaldes kolloidt guldmærket antigen, som vil have et farvet bånd. Hvis der er et farvet bånd, angiver det tilstedeværelsen af ​​målanalytter i den prøve, der blev tilsat til lateral flow-assay-testen til test- og diagnostiske formål. Og hvis der ikke er nogen farvet linje, betyder det, at resultaterne er ugyldige. Sidst, men ikke mindst, er der en kontrollinje på lateral flow-assay-enheden, som viser, at der er tilsat en tilstrækkelig mængde prøve til enheden.

For at forstå, hvordan et lateral flow-assay fungerer, er det også relevant at diskutere fortolkningen af ​​resultaterne. Først og fremmest er det vigtigt at forstå de forskellige dele af enheden, såsom konjugatpuden , prøvepuden osv. Når de konjugerede antistoffer samles ved kontrollinjerne, begynder linjerne at vise resultaterne. De synlige linjer på guld-nanosfæremærkater, som er de mest anvendte mærker, er røde og kræver ingen fremkaldelse. Dimensionerne af guld-nanopartiklerne bestemmer de forskellige nuancer af rødt, og styrken demonstreres af tærsklen for konjugerede antistoffer, der er indesluttet ved de immobiliserede linjer. Hvis en rød linje vises på testlinjen, indikerer det, at resultatet er positivt. Når det kommer til intensiteten, afhænger det af mængden af ​​analyt, der er til stede i prøvens matrix. Udseendet af kontrollinjen på lateral flow-assayenheden er også et must for at sikre, at der er givet en tilstrækkelig mængde prøve, og at mængden ikke er mindre, til at teste og give nøjagtige resultater.

Konklusion

Lateral Flow Assay fungerer relativt nemmere og mere forståeligt. Da de ikke er begrænset til laboratorier, men snarere fungerer til formål uden for laboratoriet, kan man nemt bruge dem og forstå de forskellige dele. De bemærkelsesværdige egenskaber ved lateral flow assay-enheden og guldnanopartiklerne har gjort testprocessen nemmere og mere tilgængelig. De spiller en enorm rolle i kliniske og diagnostiske formål.

Referencer
https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/lateral-flow-test
https://www.abingdonhealth.com/services/what-is-lateral-flow-immunoassay/
https://www.abingdonhealth.com/services/what-is-lateral-flow-immunoassay/
https://nanocomposix.com/pages/introduction-to-lateral-flow-rapid-test-diagnostics#target