Cal pode ser a razón para resultados falsos positivos no ensaio de fluxo lateral?

o fluxo lateral ensaio (LFA) é unha plataforma ben establecida para probas no punto de atención (POC) e a razón é o seu baixo custo e facilidade de uso, os LFA convencionais producen resultados cualitativos ou semi-cuantitativos e requiren o uso de instrumentos especializados para a detección cuantitativa . O ensaio de fluxo lateral (LFA) é unha plataforma baseada en papel para detectar e cuantificar analitos en mesturas complexas. A mostra colócase nun dispositivo de proba e os resultados móstranse nun prazo de 5 a 30 minutos. Debido aos baixos custos de desenvolvemento e á facilidade de produción de LFA, as súas aplicacións expandíronse a unha ampla gama de campos que requiren probas rápidas.

Unha mostra líquida, como sangue, soro, plasma, ouriña, saliva ou sólidos solubilizados, engádese directamente á almofada da mostra e malvada a través do dispositivo de fluxo lateral que se usará. A almofada de mostra neutraliza a mostra e filtra as partículas non desexables como os glóbulos vermellos. A mostra pode fluír libremente ata a almofada conxugada, que contén nanopartículas de alta cor ou fluorescentes cun anticorpo na súa superficie. Estas nanopartículas secas libéranse e mestúranse coa mostra cando o líquido chega á almofada conxugada. Se o anticorpo recoñece algún analito diana na mostra, uniranse ao anticorpo.

Houbo un aumento na demanda de punto de atención múltiples ensaios de diagnóstico con extensas liñas de probas que permiten a detección rápida e simultánea de mostras de punto de coidado de varios analitos na historia actual. Tales ensaios (potencialmente un único LFA) deberían ser sinxelos de realizar sen a asistencia dun laboratorio ou de persoas adestradas en análises químicas. Os ALF son excelentes candidatos porque son baratos de producir, simples de usar e, o máis importante, son amplamente aceptados polos usuarios e as autoridades reguladoras.

Aínda que o ensaio de fluxo lateral é un xeito beneficioso e o máis usado para probar, con todo hai algúns déficits e problemas no ensaio de fluxo lateral e nos resultados, en concreto. Esta é unha pregunta frecuente sobre por que se producen os resultados falsos positivos no ensaio de fluxo lateral e hai diferentes razóns para iso dependendo da rama da ciencia. Non obstante, a razón pola que os resultados falsos positivos aparecen no ensaio de fluxo lateral discútese en detalle na seguinte resposta. Cando se observa unha liña de proba na falta absoluta do analito desexado, un resultado falso positivo pode ser causado por unha variedade de factores, incluíndo unión non específica, reactividade cruzada ou anticorpos heterófilos.

Para optimizar o ensaio e eliminar resultados falsos positivos, é necesario identificar cal destes factores ou combinacións de factores está causando un resultado falso positivo. A unión non específica prodúcese cando hai unha interacción non específica entre o conxugado anticorpo-nanopartícula e o anticorpo na liña de proba, independentemente de que o analito obxectivo estea presente ou non. A unión non específica pode evitarse a miúdo simplemente optimizando o procedemento de conxugación para unha proteína específica. Optimizar a carga de anticorpos / proteínas (demasiado pouco ou demasiado anticorpo pode producir unión non específica), o tempo de incubación de anticorpos e o tampón de reacción son aspectos da optimización da conxugación. Proteínas, tensioactivos ou polímeros pódense empregar como axentes de bloqueo nun compoñente da tira de proba (por exemplo, diluente conxugado, pretratamento de almofadas de mostra, pretratamento de almofadas conxugadas, tampón de funcionamento, etc.). A reactividade cruzada diferénciase da unión non específica porque se produce cando o anticorpo se une a un analito da mostra que NON é o analito obxectivo. Este é un problema máis difícil de resolver e normalmente precisa a substitución de sistemas de anticorpos que non reaccionan cruzados con analitos non desexados.

Unha mostra que contén anticorpos heterófilos (anticorpos endóxenos que se unen aos anticorpos do ensaio) poden producir un resultado falso positivo. Varios tipos de anticorpos heterófilos poden acabar provocando reticulación entre o anticorpo conxugado coa nanopartícula e o anticorpo na liña de proba, incluso cando o analito obxectivo non está presente. Se o resultado falso positivo mostra a mesma intensidade do sinal incluso despois de diluír a mostra, en lugar dunha diminución lineal da intensidade do sinal, podería deberse a anticorpos heterófilos. Os anticorpos humanos nun exemplar que interactúan cos anticorpos do ensaio para producir resultados falsos positivos ou falsos negativos denomínanse anticorpos heterófilos. O anticorpo heterófilo pode desenvolverse nun paciente como resultado da exposición a animais específicos ou produtos de orixe animal, infección por axentes bacterianos ou virais ou non específica. Pódese producir unha proba de resultado falso positivo para varios puntos desa técnica de proba deficiente por parte do escritor (por exemplo, unha mancha grosa na tarxeta Haemoccult) e lectura de proba non válida. Unha lectura atrasada tamén pode producir un resultado falso positivo, especialmente cando se usa unha proba de aglutinación con látex. Un resultado falso positivo tamén pode ser causado pola perda fisiolóxica de sangue nun suxeito que non está dentro do rango normal.

Os resultados falsamente positivos poden ocorrer como consecuencia de alteracións da homeostase (por exemplo, reparación incompleta de escisión, detención do ciclo celular, inflamación) que poden ter lugar antes membranas celulares están comprometidas e a histopatoloxía detecta a necrose / apoptose. Estas consecuencias poden aumentar a migración de ADN no lugar de contacto e periféricamente noutros tecidos a medida que o tecido responde á lesión celular e a resposta inflamatoria sistémica avanza, dependendo da concentración de dose e da frecuencia de administración.

Conclusión

o ensaio de fluxo lateral é sinxelo, de fácil acceso e económico, pero debido ás diferentes razóns mencionadas anteriormente, os resultados poden non ser certos, ás veces. As propiedades distintivas e excepcionais dos LFA axudaron na detección de biomarcadores de enfermidades e axentes infecciosos na medicina, a agricultura, a seguridade alimentaria e a seguridade ambiental. Aínda que o principio do método conseguiu permanecer inalterado durante décadas, as técnicas de LFA melloráronse continuamente, o que resultou nunha maior sensibilidade e reproducibilidade, así como na detección simultánea de múltiples analitos. É importante destacar que estes ensaios agora pódense realizar fóra do laboratorio, o que ofrece beneficios significativos para o seu uso en países en desenvolvemento e no punto de atención, xa sexa no campo ou en entornos clínicos máis convencionais. Aínda que o ensaio de fluxo lateral pode mostrar resultados falsos positivos e viceversa, pódense probar e comprobar outros métodos para maior seguridade.

References
https://www.clinisciences.com/en/read/serological-tests-in-mycology-1190/lateral-flow-assay-lfa-2095.html
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0165993616300668
https://nanocomposix.com/pages/introduction-to-lateral-flow-rapid-test-diagnostics
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4986465/
https://www.abingdonhealth.com/services/what-is-lateral-flow-immunoassay/