Cal pode ser a razón para resultados falsos positivos no ensaio de fluxo lateral?
O ensaio de fluxo lateral (LFA) é unha plataforma ben establecida para probas no punto de atención (POC) e a razón é o seu baixo custo e facilidade de uso. Os LFA convencionais producen resultados cualitativos ou semicuantitativos e requiren o uso de instrumentos especializados para a detección cuantitativa. O ensaio de fluxo lateral (LFA) é unha plataforma baseada en papel para detectar e cuantificar analitos en mesturas complexas. A mostra colócase nun dispositivo de proba e os resultados móstranse en 5-30 minutos. Debido aos baixos custos de desenvolvemento e á facilidade de produción dos LFA, as súas aplicacións ampliáronse a unha ampla gama de campos que requiren probas rápidas.
Unha mostra líquida, como sangue, soro, plasma, ouriña, saliva ou sólidos solubilizados, engádese directamente á almofada da mostra e malvada a través do dispositivo de fluxo lateral que se usará. A almofada de mostra neutraliza a mostra e filtra as partículas non desexables como os glóbulos vermellos. A mostra pode fluír libremente ata a almofada conxugada, que contén nanopartículas de alta cor ou fluorescentes cun anticorpo na súa superficie. Estas nanopartículas secas libéranse e mestúranse coa mostra cando o líquido chega á almofada conxugada. Se o anticorpo recoñece algún analito diana na mostra, uniranse ao anticorpo.
Na actualidade , produciuse un aumento na demanda de ensaios de diagnóstico múltiple no punto de atención con amplas liñas de probas que permiten a detección rápida e simultánea de múltiples analitos en mostras no punto de atención. Estes ensaios (potencialmente un único ensaio de campo baixo) deberían ser sinxelos de realizar sen a axuda dun laboratorio ou de persoas adestradas en análise química. Os ensaios de campo baixo son excelentes candidatos porque son baratos de producir, sinxelos de usar e, o máis importante, amplamente aceptados polos usuarios e as autoridades reguladoras.
Aínda que o ensaio de fluxo lateral é un xeito beneficioso e o máis usado para probar, con todo hai algúns déficits e problemas no ensaio de fluxo lateral e nos resultados, en concreto. Esta é unha pregunta frecuente sobre por que se producen os resultados falsos positivos no ensaio de fluxo lateral e hai diferentes razóns para iso dependendo da rama da ciencia. Non obstante, a razón pola que os resultados falsos positivos aparecen no ensaio de fluxo lateral discútese en detalle na seguinte resposta. Cando se observa unha liña de proba na falta absoluta do analito desexado, un resultado falso positivo pode ser causado por unha variedade de factores, incluíndo unión non específica, reactividade cruzada ou anticorpos heterófilos.
Para optimizar o ensaio e eliminar resultados falsos positivos, é necesario identificar cal destes factores ou combinacións de factores está causando un resultado falso positivo. A unión non específica prodúcese cando hai unha interacción non específica entre o conxugado anticorpo-nanopartícula e o anticorpo na liña de proba, independentemente de que o analito obxectivo estea presente ou non. A unión non específica pode evitarse a miúdo simplemente optimizando o procedemento de conxugación para unha proteína específica. Optimizar a carga de anticorpos / proteínas (demasiado pouco ou demasiado anticorpo pode producir unión non específica), o tempo de incubación de anticorpos e o tampón de reacción son aspectos da optimización da conxugación. Proteínas, tensioactivos ou polímeros pódense empregar como axentes de bloqueo nun compoñente da tira de proba (por exemplo, diluente conxugado, pretratamento de almofadas de mostra, pretratamento de almofadas conxugadas, tampón de funcionamento, etc.). A reactividade cruzada diferénciase da unión non específica porque se produce cando o anticorpo se une a un analito da mostra que NON é o analito obxectivo. Este é un problema máis difícil de resolver e normalmente precisa a substitución de sistemas de anticorpos que non reaccionan cruzados con analitos non desexados.
Unha mostra que contén anticorpos heterófilos (anticorpos endóxenos que se unen aos anticorpos do ensaio) pode producir un resultado falso positivo. Varios tipos de anticorpos heterófilos poden acabar causando entrelazamentos entre o anticorpo conxugado á nanopartícula e o anticorpo na liña de proba, mesmo cando o analito diana non está presente. Se o resultado falso positivo mostra a mesma intensidade de sinal mesmo despois de diluír a mostra, en lugar dunha diminución lineal na intensidade do sinal, podería deberse a anticorpos heterófilos. Os anticorpos humanos nunha mostra que interactúan cos anticorpos do ensaio para producir resultados falsos positivos ou falsos negativos denomínanse anticorpos heterófilos. O anticorpo heterófilo pode desenvolverse nun paciente como resultado da exposición a animais ou produtos animais específicos, infección con axentes bacterianos ou virais, ou de forma non específica. Un resultado falso positivo na proba pode producirse por varios puntos dalgunha técnica de proba deficiente por parte da persoa seleccionada (por exemplo, frotis groso na tarxeta Haemoccult) e lectura de proba non válida. Unha lectura atrasada tamén pode resultar nun resultado falso positivo, especialmente cando se usa unha proba de aglutinación de látex. Un resultado falso positivo tamén pode ser causado pola perda fisiolóxica de sangue nun suxeito que non está dentro do rango normal.
Os resultados falsos positivos poden producirse como resultado de alteracións da homeostase (por exemplo, reparación por escisión incompleta, detención do ciclo celular, inflamación) que poden ter lugar antes de que as membranas celulares estean comprometidas e a necrose/apoptose sexa detectable por histopatoloxía. Estas consecuencias poden aumentar a migración do ADN no lugar do contacto, así como periféricamente noutros tecidos a medida que o tecido responde á lesión celular e a resposta inflamatoria sistémica progresa, dependendo da concentración da dose e da frecuencia de administración.
Conclusión
O ensaio de fluxo lateral é sinxelo, de fácil acceso e económico, pero debido ás diferentes razóns mencionadas anteriormente, os resultados poden ser incorrectos ás veces. As propiedades distintivas e excepcionais dos ácidos graxos lipídicos (LFA) axudaron na detección de biomarcadores de enfermidades e axentes infecciosos na medicina, a agricultura, a seguridade alimentaria e a seguridade ambiental. Aínda que o principio do método conseguiu permanecer inalterado durante décadas, as técnicas de LFA melloráronse continuamente, o que resultou nun aumento da sensibilidade e reproducibilidade, así como na detección simultánea de múltiples analitos. É importante destacar que estes ensaios agora pódense realizar fóra do laboratorio, o que ofrece beneficios significativos para o seu uso en países en desenvolvemento e no punto de atención, xa sexa no campo ou en entornos clínicos máis convencionais. Aínda que o ensaio de fluxo lateral pode mostrar resultados falsos positivos e viceversa, pódense probar e comprobar outros métodos para maior seguridade.
References
https://www.clinisciences.com/en/read/serological-tests-in-mycology-1190/lateral-flow-assay-lfa-2095.html
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0165993616300668
https://nanocomposix.com/pages/introduction-to-lateral-flow-rapid-test-diagnostics
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4986465/
https://www.abingdonhealth.com/services/what-is-lateral-flow-immunoassay/