Que fai que os anticorpos se manteñan na proba de fluxo lateral da membrana de nitrocelulosa?
Membrana de nitrocelulosa no Fluxo lateral O ensaio vén despois da mostra e da almofada conxugada. A membrana de nitrocelulosa tamén se chama membrana de substrato e é unha das partes máis cruciais e sensibles aos resultados da proba realizada no Ensaio de caudal lateral. No ensaio de fluxo lateral, poderían utilizarse diferentes materiais como acetato de celulosa, fluoruro de polivinilideno (PVDF), nylon modificado por carga e polietersulfona (PES), etc. Na membrana de nitrocelulosa hai diferentes tamaños de poros, porosidade e grosor , e tratamento químico. As membranas de nitrocelulosa non teñen unha distribución igual de poros, polo tanto o tempo de fluxo capilar é máis preferido. Antes de avanzar no razoamento é importante coñecer o fluxo capilar. Basicamente, o tempo de fluxo capilar mídese en segundos ou centímetros e é o tempo total que a mostra tardou en encherse completamente na tira de probas ou no dispositivo de ensaio de fluxo lateral.
A membrana de nitrocelulosa actúa como un corpo portador dos anticorpos do dispositivo de ensaio de fluxo lateral. Tamén se usan co propósito de cribar diferentes procesos e tipos de anticorpos, é dicir, monoclonais, e isto ocorre como resultado da modificación do ensaio enzimoinmuno.
No membrana de nitrocelulosa, os anticorpos mantéñense e conxúganse coas partículas biolóxicas de látex ou de ouro. Non se permite que os anticorpos se movan e están inmobilizados na membrana de nitrocelulosa por diversos motivos. Como hai liñas de proba e liñas de control no ensaio de fluxo lateral, os anticorpos quedan atrapados entre estas dúas liñas. Considerando a liña de proba, úsase para unir a proteína da mostra mentres que a liña de control ten os anticorpos específicos da especie que se usan para detectar aínda máis os anticorpos da mostra. Outra razón pola que os anticorpos permanecen na membrana de nitrocelulosa é o tamaño dos poros da película de apoio. A película de respaldo non porosa da membrana de nitrocelulosa non permite que os anticorpos deslízanse, senón que se manexan ben e quedan así na membrana. Isto tamén axuda a reducir a variabilidade.
Outros factores importantes que fan que os anticorpos permanezan na membrana de nitrocelulosa son a selección do diluínte de anticorpos, o método de secado, a concentración de anticorpos de captura e a velocidade de dispensación do reactivo. É necesario un secado axeitado para garantir que os anticorpos de captura se adhiran á membrana; non obstante, as membranas con soporte tardan moito máis en secar en comparación coas membranas sen soporte. Ademais da complexidade, as preocupacións do usuario, a preparación da mostra, o mantemento, a reproducibilidade e a interpretación sinxela dos resultados, sempre se debe asegurar a detección sensible dos parámetros especificados. Algúns destes estándares, como a interpretación dos resultados e a sensibilidade, son fortemente atribuíbles á inmobilización e retención espacial dos axentes de detección cos parámetros da área de proba.
Outro enfoque que axuda a facer que os anticorpos queden na membrana de nitrocelulosa é a fixación covalente dos anticorpos á membrana do ensaio de fluxo lateral. Ademais, a inmobilización non covalente dos anticorpos na membrana de nitrocelulosa de LFA deixa entrever a capacidade moi forte das membranas de nitrocelulosa para unirse a ela. Como se mencionou anteriormente, no ensaio de fluxo lateral hai partículas sensibles e cruciais para a proba da mostra. Ligando isto ás partículas de ouro coloidal, demostraron que os antíxenos permanecen na membrana de celulosa. Neste proceso, o primeiro paso é a adsorción pasiva do anticorpo necesario na superficie da nanopartícula de ouro coloidal. Este é un dos retos máis difíciles no ensaio de fluxo lateral. Para este propósito, creáronse as partículas de conxugación que fan que os anticorpos, moléculas e outros elementos queden facilmente na membrana de nitrocelulosa.
Isto tamén ofrece a fácil fixación e revestimento dos anticorpos na superficie, incluíndo outros analitos e incluso biomoléculas. Ademais de que as perlas de látex no ensaio de fluxo lateral tamén son útiles para facer que os anticorpos queden na membrana de nitrocelulosa. Ademais, a conxugación pasiva tamén pode axudar a facer que os anticorpos queden na membrana nitrocelulosa da proba de fluxo lateral. Aínda que estes procesos e causas poden facer que os anticorpos permanezan na membrana de nitrocelulosa do ensaio de fluxo lateral, son procesos moi longos e moi longos. Non só isto, senón que require un equipo grande e outras cousas que o fan axitado e moi custoso. Ademais, algunhas causas requiren a optimización activa do pH e isto é unha cousa extensa, polo tanto, incorporáronse novas metodoloxías e procesos ao dispositivo Lateral Flow Assay que leva ao uso doutros métodos. Un par de anticorpos están inmobilizados especificamente na nitrocelulosa por absorción física. Con raíces profundas na investigación, os anticorpos tamén poden permanecer na membrana de nitrocelulosa debido á interacción específica hidrofóbica e dipolar entre ambos os dominios proteicos e a nitrocelulosa, o que resulta na preservación da orientación dos anticorpos.
Conclusión
Para concluílo e resumilo á luz da descrición anterior, a nitrocelulosa é unha parte importante do ensaio de fluxo lateral e do dispositivo usado para a proba. Un dos factores máis importantes e vitais que determinan o ensaio de fluxo lateral e a súa sensibilidade é a membrana ou substrato Membrana de nitrocelulosa. As liñas de proba e control están trazadas sobre a membrana para garantir unha boa unión e captura dos anticorpos. A adsorción non específica nas liñas de proba e control pode afectar a sensibilidade dos resultados, dando lugar a valores de resultados falsos. Como a nitrocelulosa é unha das partes do ensaio de fluxo lateral desde onde se pasa a mostra. A partir da mostra, os anticorpos e as partes antixénicas da mostra e do dispositivo conxúganse entre si e pasan á parte seguinte. A partir de aí, a mostra flúe cara á membrana de nitrocelulosa que, en consecuencia, leva os anticorpos e antíxenos necesarios para a proba. As propiedades e os motivos que provocan a permanencia do antíxeno na membrana de nitrocelulosa describíronse no detalle anterior cubrindo así o tema do traballo.
References
https://www.creative-diagnostics.com/Immunochromatography-guide.htm
https://fnkprddata.blob.core.windows.net/domestic/download/pdf/IBS_A_guide_to_lateral_flow_immunoassays.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6350463/
https://www.bakerlab.org/wp-content/uploads/2015/12/Holstien_Anal_Bioanal_Chem_2015.pdf
https://www.nature.com/articles/s41598-021-87072-7
https://www.researchgate.net/topic/Nitrocellulose