Pandhuan Pangembangan Assay Flow Sisih
Aliran Sisih pengujian kadar logam yaiku piranti sing digunakake kanggo tes cepet ing omah lan uga kanggo tes klinis. Iki minangka piranti sing paling dipercaya lan akurat sing digunakake ing meh kabeh negara maju lan berkembang. Uga, ing aliran tambahan Assay Pandhuan Pangembangan wis meh 10 langkah kanggo nemtokake proses pangembangan Assay Flow lateral. Biasane Tes Mengko Sisih duwe pad conto, pad konjugat, membran nitroselulosa, label adsorbent pad, lan buffer. Nanging, bisa uga ana sawetara pangowahan ing label amarga ana macem-macem label sing digunakake ing tes aliran lateral.
Kanggo miwiti pandhuan pangembangan tes aliran lateral, penting kanggo nimbang sawetara tumindak sadurunge miwiti proses. Kaping pisanan, penting kanggo nganalisis format sing bakal dipilih kanggo tes aliran tambahan manawa bakal kompetitif utawa format sandwich. Sejatine, pandhuan pangembangan aliran Assay aliran gumantung karo proses pangembangan tes. Langkah kritis lan penting sing paling penting yaiku ngenali tes kontrol sing bakal mbantu ngenali target target ing sampel. Pandhuan pangembangan iki bakal menehi proses pangembangan LFA umum amarga tes sing beda uga duwe proses sing beda.
Langkah kapisan menyang pandhuan pangembangan yaiku pilihan nanopartikel. Pilihan nanopartikel beda-beda kanthi ukuran lan bentuk. Kasedhiya macem-macem ukuran kanggo tes aliran tambahan. Uga ana nanopartikel emas 40nm kanthi karbon utawa permukaan sitrat sing bisa digunakake kanggo proses adsorpsi protein. Nanopartikel liyane sing bisa dipilih kanggo pangembangan LFA kalebu emas karboksil, nanoksil emas karboksil, lan liya-liyane. Kajaba iku, ana probe liyane kayata manik-manik selulosa, polistiren sing dicelup, lan probe neon. Titik tambah saka nanopartikel emas karboksil yaiku kanggo proses adsorpsi, luwih sithik antibodi dibutuhake lan amarga nanopartikel kasebut obligasi digawe yaiku ikatan amida sing stabil lan ora bisa dibalekake. Nanging, kudu dielingi manawa kekuwatan sing diasilake sing ditemokake ing antarane nanopartikel lan antibodi amarga lingkungan kopling.
Langkah kapindho yaiku Seleksi Antibodi. Pilihan antibiotik minangka langkah kritis amarga kinerja LFA gumantung karo afinitas antibodi, kinetika, lan sifat sterik liyane. Kajaba iku, ikatan antibodi penting kanggo ndeteksi asil. Faktor penting liyane nalika milih antibodi yaiku rong jinis kasebut. Rong jinis antibodi yaiku monoklonal lan polikonal. Antibodi monoklonal gampang digawe, nanging antibodi poliklonal duwe sensitivitas sing cukup dhuwur dibandhingake karo monoklonal. Ing langkah proses pemilihan antibodi, isih ana rong langkah yaiku reresik antibodi, lan antibodi garis kontrol. Ing pilihan antibodi, batang sing disaranake yaiku nyaring antibodi amarga kudu dites sadurunge. Antibodi bisa disaring lan dites kanthi nggawe versi awal tes tes awal lan awal sing bisa digunakake minangka piranti conto tes. Kinerja antibodi beda karo macem-macem jinis LFA. Contone, ing ELISA kinetika ora pati penting. Lan ngomong babagan tes aliran lateral, ana kahanan tartamtu sing kudu ditindakake antibodi. Kaping pisanan, antibodi kudu aktif sanajan wis konjugasi karo nanopartikel lan integritas struktural ora dilarani kanthi cara apa wae. Kajaba iku, dheweke kudu duwe katrampilan langsung menehi reaksi nalika sampel bakal dihidrasi maneh dening sampel. Wektu inkubasi ing jinis Assay liyane luwih dawa dibandhingake karo Assay Flow lateral sing naleni karo garis uji kudu ditindakake sajrone sawetara detik.
Proses kaping telu ing proses iki yaiku membran nitrocellulose lan minangka bagean penting saka LFA amarga duwe test lan garis kontrol. Membran nitrocellulose uga duwe reagen sing bisa ngasilake asil. Kasedhiya kanthi macem-macem ukuran, porositas, lan desain. Sejatine, membran nitroselulosa gumantung karo wektu aliran kapiler. Kanthi wektu aliran kapiler, tegese wektu sing dibutuhake kanggo sampel ngalir nganti 4cm. Ing langkah iki, ana langkah liya sing diarani pelucutan membran. Buffer sing protein belang bisa duwe pengaruh sing signifikan marang asil pungkasan saka tes aliran lateral. Sanajan akeh protein sing bisa larut ing 1x PBS, sawetara sensitif banget marang pH, konsentrasi uyah, lan kedadeyan stabilisator sing bisa diarani trehalose. Pengupasan membran minangka langkah penting liyane sing bakal ditindakake. Ing langkah iki, desain tes tes aliran lateral yaiku kanggo stripe tes lan ngontrol garis-garis antibodi sing ana ing membran nitrocellulose. Pertimbangan penting ing langkah iki yaiku membran nitrocellulose, sing diarani ora njaga membran nitroselulosa ing papan sing ora ana asor, kabeh wis garing. Kanggo pangembangan tes aliran sisih, suhu kanggo membran nitroselulosa lembab. Amarga ana macem-macem format tes, kayata format kompetitif lan format sandwich sing uga penting banget. Konsentrasi antibodi beda-beda ing loro format kanggo format sandwich, konsentrasi antibodi sing disaranake yaiku 1mg / mL kanggo mung uji coba lan antibodi garis kontrol lan watesan iki bisa nganti 0.5 nganti 2 mg / mL. Ing langkah membran nitroselulosa lan pandhuan pangembangan aliran lateral, langkah liyane sing kalebu yaiku langkah pemblokiran membran. Nindakake langkah iki duwe akeh mupangat kayata aliran fluida sing luwih apik, stabilitas tes test, lan mblokir ikatan sing ora spesifik saengga ngasilake asil sing sejatine. Kanggo umume membran nitroselulosa ing tes aliran lateral, ana solusi proprietari sing ditambahake kanggo nggawe membran dadi hidrofilik.
Langkah sabanjure yaiku bantalan konjugat lan konjugat. Kanggo nggawe tes aliran lateral, penting nggawe parameter konjugasi sing optimal. Nalika konjugat disiapake kanggo tes aliran lateral, mula banjur dikeringake menyang bantalan konjugat. Kanggo ngembangake konjugasi antibodi sing stabil bisa uga ana sawetara langkah. Langkah-langkah sing ana gandhengane kanggo ngrembakakake efikasi konjungsi lan kohesi. Ing langkah iki, stabilitas konjugasi minangka langkah sing penting banget, mula stabilitas koloid kudu dioptimalake nalika ngrancang LFA. kestabilan koloid penting banget kanggo tes aliran lateral lan mulane nalika ngrancang lan ngoptimalake LFA, iki bakal terus dipikirake. Nanopartikel emas sing duwe peran penting ing konjugasi ing LFA duwe ciri optik sing unik banget kanthi mbantu nyedhot lan nyebar cahya kanthi akurasi lan khasiat. Interaksi sing kuat antara nanopartikel lan cahya kedadeyan amarga elektron konduksi sing ana ing permukaan logam sing nyebabake osilasi kolektif nalika elektron dadi bungah karo cahya kanthi frekuensi sing padha lan padha. Sawise ana konjugasi sing sukses, ana sawetara efek ing ciri optik amarga pangowahan kasebut diamati ing indeks bias sing luwih bisa dilacak ing spektrum UV-vis kanthi pambeda garis abang. Uga kanggo perawatan pad konjugasi, bisa uga ana macem-macem cara. Sawetara wong kecemplung, utawa nyemprot kanthi seragam kanthi bantuan dispenser otomatis.
Sawise iki, proses pemilihan conto pad ana. Iki minangka bagean kapisan saka aliran sisih amarga iki penting banget kanggo mriksa bahan pad conto lan perawatan sadurunge pad sampel kanggo aliran lan kesahihane. Bantalan sampel sing digunakake kanggo tes aliran lateral yaiku macem-macem jinis kayata serat, katun, sintetis, lan liya-liyane. Uga ditemokake yen sawetara sampel kayata urin, getih, lsp bisa beda-beda amarga akeh faktor liyane sing kalebu kalebu faktor biologis, mangan wektu, ngombe sing dijupuk sadurunge nglumpukake sampel ing piranti tes aliran lateral, lan liya-liyane. Kanggo ngrawat pad sampel lan ngoptimalake buffer sing dioptimalake bisa digunakake sing uga duwe kaluwihan. Nalika ngembangake tes aliran lateral, lan milih pad sampel buffer ootmized bisa nambah kinerja tes kanthi nyuda variabilitas sampel sing kalebu protein, pH, viskositas, konsentrasi uyah, lan liya-liyane. aliran lan konsistensi tes nalika lagi dikembangake. Penyangga perawatan kabukten migunani banget kanggo njaga aliran lan konsistensi, normalake pH, digunakake minangka agen pemblokiran kanthi gabungan protein, uyah, surfaktan kanthi konsentrasi masing-masing. Spesifikasi sing paling penting kanggo pad sampel yaiku kapasitas penyerapan amarga nyritakake babagan volume sampel kanggo tes.
Sawise sampel pad dipilih, pilihan sumbu pad sabanjure. Wicking pad mbantu proses adsorpsi saka reagen sing ora dijupuk kanthi baris apa, yaiku garis uji lan garis kontrol. Wicking pad uga mandhegake aliran mundur saka cairan sing digunakake minangka conto. Disaranake nalika milih materi kanggo wicking pad, bahan kasebut kudu dicenthang kanggo nyimpen piranti saka bedho sing bisa nyebabake masalah lan bisa uga asil sing salah. Saliyane bahan normal, bahan kandel utawa wicking ora luwih apik tinimbang bahan sing luwih tipis. Materi sing luwih tipis luwih apik nalika performa luwih apik lan biasane duwe bahan kapasitas sing luwih dhuwur. Nanging saben materi kudu dicenthang babagan ciri lan kesesuaiane kanggo pangembangan tes aliran lateral. Kanggo milih ukuran lan bahan saka wicking pad, kudu tetep selaras karo faktor kapasitas panyerepan kudu luwih dhuwur lan volume buffer kudu mlaku.
Ing tes aliran tambahan, kumpulan tes Strip uga minangka langkah pandhuan pangembangane. Ing test strip test, LFA dipasang adhedhasar manufaktur gedhe utawa manufaktur skala cilik. Kanggo sawetara jinis tes aliran lateral, read-out kuantitatif bisa uga ora sarat nanging format dipstick dibutuhake kanggo mbukak majelis tes Strip ing LFA. Ana kaset sing duwe test strip ing njero minangka salah sawijining langkah sing paling penting lan penting kanggo nggayuh tes sing bisa direproduksi lan uga bisa dipercaya. Rong spesifikasi kasebut sadurunge penting banget kanggo tes kuantitatif, utamane. Karya utama kaset yaiku menehi tekanan marang cairan sing dibutuhake. Iki kanggo mesthekake yen ana aliran optimal lan cairan uga ngliwati kumpulan kanthi aliran sing padha. Kaset uga nggawe manawa cairan kasebut ora tetep ana ing pinggir lan mung ngalir ing bantalan.
Sawise majelis tes Strip, langkah sabanjure mbukak tes. Ana macem-macem teknik mbukak tes kasebut kayata tes kabupaten ing konjugat cair, tes lengkap kanggo konjugat garing, lan buffer sing mlaku. Kanggo analisis strip, kudu dingerteni manawa tes kualitatif utawa kuantitif lan cara analisis sing bener kudu dipilih. Kanggo nganalisa tes kasebut, bisa ditindakake kanthi mripat kanthi tlaga sing bakal ana asil ya / ora utawa njupuk kesan garis tes, scanner flatbed utawa kamera kanthi cahya sing dikontrol bisa digunakake. Langkah pungkasan yaiku ngoptimalake tes sing milih pasangan antibodi sing bener, membran nitrocellulose, pad sumbu, pad adsorben, lan kabeh bagean liyane.
kesimpulan:
The pandhuan pangembangan Assay Flow lateral disedhiyakake sangang nganti sepuluh langkah sing kudu ditindakake kanthi bener kanggo nggawe tes aliran lateral.
Cathetan Suku
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0257/8237/files/BioReady_Lateral_Flow_Handbook.pdf