안티텍 - Latarl Flow Assay 재료 및 Lateral Flow Assay 개발 장비
측면 흐름 개발

측면 흐름 분석 개발 가이드

Poted on 18월 2021일, XNUMX년 by 리사 

측면 흐름 시험 가정에서의 신속한 검사와 임상검사에 사용되는 장비입니다. 거의 모든 선진국과 개발 도상국에서 사용되는 가장 안정적이고 정확한 장치입니다. 또한, 측면 흐름 분석 개발 가이드 측면 흐름 분석의 개발 프로세스를 결정하는 거의 10단계가 있습니다. 대개, 측면 흐름 분석 샘플 패드, 접합체 패드, 니트로셀룰로오스 멤브레인, 라벨 흡착제 패드 및 완충제가 있습니다. 그러나 측면 흐름 분석에 사용되는 다른 레이블이 있으므로 레이블에 약간의 변경이 있을 수 있습니다.

신속한 테스트 키트 조립 기계
신속한 테스트 키트 조립 기계

시작하려면 측면 흐름 분석 개발 가이드, 프로세스를 시작하기 전에 몇 가지 작업을 고려하는 것이 중요합니다. 우선, 경쟁 형식인지 샌드위치 형식인지 여부에 관계없이 측면 흐름 분석에 대해 선택할 형식을 분석하는 것이 중요합니다. 기본적으로 Lateral flow Assay의 개발 가이드는 assay 개발 과정에 따라 다릅니다. 첫 번째 중요하고 가장 중요한 단계는 시료에서 표적 분석물을 식별하는 데 도움이 되는 대조 분석을 식별하는 것입니다. 이 개발 가이드는 다른 분석법에도 다른 프로세스가 있기 때문에 일반적인 LFA 개발 프로세스를 제공합니다.

를 향한 첫걸음 개발 가이드 나노 입자의 선택입니다. 나노 입자 선택은 크기와 모양이 다양합니다. 측면 흐름 분석에 사용할 수 있는 다양한 크기가 있습니다. 또한 단백질의 흡착 과정에 추가로 사용할 수 있는 탄소 또는 구연산염 표면을 가진 40nm 금 나노 입자가 있습니다. LFA의 개발을 위해 선택할 수 있는 다른 나노 입자는 셀룰로오스 비드, 염색된 폴리스티렌 및 형광 프로브와 같은 다른 프로브가 있는 것 외에 카르복실 금, 카르복실 금 나노쉘 등이 있습니다. 카르복실 금 나노입자 선택의 장점은 흡착 과정에 필요한 항체가 매우 적고 이러한 나노입자로 인해 안정하고 비가역적인 아미드 결합인 결합이 형성된다는 것입니다. 그러나 나노 입자와 항체 사이에서 발견되는 결과적인 힘은 결합 환경 때문이라는 점을 염두에 두어야 합니다.

두 번째 단계는 항체 선택입니다. LFA의 성능은 항체의 친화도, 동역학 및 기타 입체적 특성에 따라 달라지므로 항체 선택은 중요한 단계입니다. 또한 항체의 결합은 결과의 검출에 중요합니다. 항체를 선택할 때 또 다른 중요한 요소는 두 가지 유형입니다. 두 가지 유형의 항체는 모노클로날과 폴리클로날입니다. 단클론항체는 제조가 용이한 반면 다클론항체는 단클론항체에 비해 상대적으로 감도가 높다. 항체 선별 과정에는 항체 정제와 대조군 항체의 두 가지 단계가 더 있습니다. 항체 선택에서 제안된 줄기는 미리 검사해야 하는 이유로 항체를 스크리닝하는 것입니다. 항체는 테스트 샘플 장치로 작동할 수 있는 측면 흐름 분석의 매우 예비 및 초기 버전을 구축하여 스크리닝 및 테스트할 수 있습니다. 항체의 성능은 다른 종류의 LFA에서 다릅니다. 예를 들어, ELISA에서 동역학은 그다지 중요하지 않습니다. 그리고 측면 흐름 분석에 대해 말하면 항체가 수행할 수 있어야 하는 특정 조건이 있습니다. 첫째, 항체는 나노입자와 접합된 후에도 활성이 있어야 하며 구조적 무결성이 어떠한 방식으로도 손상되지 않아야 합니다. 또한 시료가 시료에 의해 다시 수화되었을 때 즉시 반응을 일으킬 수 있는 능력이 있어야 합니다. 다른 종류의 Assay에서 배양 시간은 테스트 라인에 바인딩이 몇 초 안에 이루어져야 하는 Lateral Flow Assay에 비해 더 깁니다.

측면 흐름 테스트 제조업체
측면 흐름 테스트 제조업체

이 공정의 세 번째 공정은 니트로셀룰로오스 멤브레인으로, LFA에 Test Line과 Control Line이 있어 매우 중요한 부분입니다. 니트로셀룰로오스 막에는 결과를 생성하는 시약도 있습니다. 다양한 크기, 다공성 및 디자인으로 제공됩니다. 실제로, 니트로셀룰로오스 막은 모세관 흐름 시간에 따라 달라집니다. 모세관 흐름 시간이란 시료가 4cm까지 흐르는데 필요한 시간을 의미합니다. 이 단계에서 멤브레인 스트리핑이라고 하는 또 다른 단계가 있습니다. 특정 단백질이 줄무늬가 있는 버퍼는 모든 측면 흐름 분석의 최종 결과에 상당한 영향을 미칠 수 있습니다. 많은 단백질이 1x PBS에 용해될 수 있지만 일부는 pH, 염 농도 및 트레할로스라고 부를 수 있는 안정제의 발생에 매우 민감합니다. 멤브레인 스트리핑은 이 단계와 함께 제공되는 또 다른 중요한 단계입니다. 이 단계에서 측면 흐름 분석 테스트의 디자인은 테스트를 스트라이프하고 니트로셀룰로오스 막에 존재하는 항체 라인을 제어하는 ​​것입니다. 이 단계에서 중요한 고려 사항은 니트로셀룰로오스 멤브레인을 수분이 없는 곳에 두지 않고 완전히 건조시키는 것입니다. 측면 흐름 분석의 개발을 위해 니트로셀룰로오스 멤브레인의 온도는 습해야 합니다. 분석 형식이 다르기 때문에 경쟁 형식과 샌드위치 형식도 매우 중요합니다. 항체 농도는 샌드위치 형식의 두 형식 모두에서 다르며 권장 항체 농도는 테스트 및 대조군 항체에 대해서만 1mg/mL이며 이 제한 범위는 최대 0.5~2mg/mL입니다. 니트로셀룰로오스 멤브레인 단계 및 측면 흐름 개발 가이드에 포함된 또 다른 단계는 멤브레인 차단 단계입니다. 이 단계를 수행하면 유체의 흐름 개선, 테스트 스트립의 안정성 및 비특이적 결합 차단과 같은 많은 이점이 있어 진정한 결과를 얻을 수 있습니다. 측면 유동 분석에서 대부분의 니트로셀룰로오스 멤브레인의 경우 멤브레인을 친수성으로 만들기 위해 에 추가된 독점 솔루션이 있습니다.

다음 단계는 접합체 및 접합체 패드입니다. 측면 흐름 분석을 개발하기 위해서는 최적화된 활용 매개변수를 개발하는 것이 중요합니다. 측면 유동 분석을 위해 접합체가 준비되면 접합체 패드에 분배 및 건조됩니다. 항체의 안정화된 접합을 개발하기 위해 여러 단계가 있을 수 있습니다. 결합의 응집력 및 강화된 효능을 개발하는 단계. 이 단계에서 접합 안정성은 매우 중요한 단계이므로 LFA를 설계할 때 콜로이드 안정성을 최적화해야 합니다. 콜로이드 안정성은 측면 흐름 분석에 매우 중요하므로 LFA를 설계하고 최적화하는 동안 항상 이를 고려합니다. LFA에서 접합에 중요한 역할을 하는 금 나노 입자는 정확하고 효율적으로 빛을 흡수하고 분산시키는 매우 독특한 광학 특성을 가지고 있습니다. 나노 입자와 빛 사이의 강한 상호 작용은 금속 표면에 존재하는 전도 전자로 인해 발생하며 전자가 동일하고 동일한 주파수의 빛에 의해 여기될 때 집합적 진동을 초래합니다. 성공적인 접합이 이루어진 후에는 굴절률의 변화가 관찰되기 때문에 광학 특성에 약간의 영향이 있으며, 이는 적색 선의 구별에 의해 UV-vis 스펙트럼에서 더 추적될 수 있습니다. 또한 접합 패드의 처리에는 다른 방법이 있을 수 있습니다. 그 중 일부는 침지 또는 자동 디스펜서의 도움으로 균일하게 분사됩니다.

그런 다음 샘플 패드 선택 프로세스가 발생합니다. 이것은 의 첫 번째 부분이다. 측면 흐름 따라서 분석에서는 샘플 패드 재료와 샘플 패드의 전처리를 확인하여 흐름과 효능을 확인하는 것이 필수적입니다. 측면 유동 분석에 사용되는 샘플 패드는 섬유, 면, 합성 등과 같은 다양한 종류입니다. 또한 소변, 혈액 등과 같은 일부 샘플은 생물학적 요인, 식사 시간, 측면 흐름 분석 장치에서 샘플을 수집하기 전에 마신 음료 및 기타 여러 가지가 포함됩니다. 샘플 패드를 처리하고 최적화하기 위해 최적화된 버퍼를 사용할 수 있으며 이는 또한 많은 장점을 가지고 있습니다. 측면 흐름 분석을 개발하고 샘플 패드를 선택하는 동안 ootmized 버퍼를 선택하면 단백질, pH, 점도, 염 농도 등을 포함하는 샘플의 변동성을 줄임으로써 분석 성능을 향상시킬 수 있습니다. 또한 분석 성능을 향상시킬 수 있습니다. 개발되는 동안 분석의 흐름과 일관성. 처리 완충액은 흐름과 일관성을 유지하고 pH를 정상화하며 단백질, 염, 계면활성제를 각각 적절한 농도로 혼합하여 차단제 역할을 하는 데 매우 도움이 되는 것으로 입증되었습니다. 확인해야 할 샘플 패드의 가장 중요한 사양은 테스트를 위한 샘플 부피를 알려주기 때문에 흡수 용량입니다.

샘플 패드를 선택한 후에는 심지 패드 선택이 이어집니다. 위킹 패드는 라인, 즉 테스트 라인과 컨트롤 라인에 의해 흡수되지 않은 시약의 흡착 과정을 돕습니다. 위킹 패드는 또한 샘플로 사용되는 유체의 역류를 중지합니다. 심지 패드의 재료를 선택하는 동안 문제와 잘못된 결과로 이어질 수 있는 불일치로부터 장치를 저장하기 위해 재료를 확인해야 합니다. 보통이외에는 두꺼운 소재나 심지패드가 얇은 소재보다 좋지 않습니다. 더 얇은 재료가 더 나은 성능을 발휘하고 일반적으로 때때로 더 높은 용량의 재료를 갖습니다. 그러나 모든 재료의 특성과 측면 유동 분석 개발에 대한 적합성을 확인해야 합니다. 위킹 패드의 크기와 재질을 선택하려면 흡수 용량이 더 높아야 하고 버퍼 볼륨이 작동해야 하는 요소와 일치하도록 유지해야 합니다.

측면 흐름 분석에서 스트립 테스트 어셈블리는 개발 가이드의 단계이기도 합니다. 스트립 테스트 어셈블리에서 LFA는 대규모 제조 또는 소규모 제조를 기반으로 조립됩니다. 일부 유형의 측면 흐름 분석의 경우 정량적 판독이 요구 사항이 아닐 수 있지만 LFA에서 스트립 테스트 어셈블리를 실행하려면 계량봉 형식이 필요합니다. 내부에 스트립 테스트가 있는 카세트가 있습니다. 이는 재현 가능하고 신뢰할 수 있는 분석을 달성하기 위한 가장 필수적이고 중요한 단계 중 하나입니다. 앞서 언급한 두 가지 사양은 특히 정량 테스트에서 매우 중요합니다. 카세트의 주요 작업은 유체에 필요한 압력을 제공하는 것입니다. 이는 최적의 흐름이 있고 유체도 동일한 흐름으로 어셈블리를 통과하도록 하기 위한 것입니다. 카세트는 또한 액체가 가장자리에 남아 있지 않고 패드에 흐르도록 합니다.

스트립 테스트 어셈블리 후 다음 단계는 분석을 실행하는 것입니다. 액체 결합체의 지역 분석, 건조 결합체에 대한 전체 분석 및 완충액 실행과 같은 분석을 실행하기 위한 다양한 기술이 있습니다. 스트립의 분석을 위해서는 테스트가 정성적인지 정량적인지 알고 올바른 분석 방법을 선택해야 합니다. 분석을 분석하기 위해 예/아니오 결과가 있는 육안으로 수행하거나 테스트 라인의 인상을 캡처하여 평판 스캐너 또는 조명이 제어되는 카메라를 사용할 수 있습니다. 마지막 단계는 올바른 항체 쌍, 니트로셀룰로오스 막, 심지 패드, 흡착제 패드 및 기타 모든 부품을 선택하는 분석의 최적화입니다.

결론 :

또한 측면 흐름 분석의 개발 가이드 측면 흐름 분석을 생성하기 위해 철저히 따라야 하는 XNUMX~XNUMX단계가 제공됩니다.

참조

https://cdn.shopify.com/s/files/1/0257/8237/files/BioReady_Lateral_Flow_Handbook.pdf

AntiTeck 생명 과학

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