Водич за развој на анализа на страничен проток
Тестот за латерален проток е уред што се користи за брзо тестирање дома, а исто така и за клиничко тестирање. Тие се најсигурните и најточните уреди што се користат во скоро секоја развиена и земја во развој. Исто така, Водичот за развој на тест за латерален проток има скоро 10 чекори што го одредуваат процесот на развој на тест за латерален проток. Вообичаено, тестовите за латерален проток имаат примерок, конјугат, нитроцелулозна мембрана, етикети, адсорбентна подлога и пуфер. Сепак, може да има некои промени во етикетите бидејќи постојат различни етикети што се користат во тестовите за латерален проток.
За да се започне со упатството за развој на анализата на латерален проток , важно е да се земат предвид неколку чекори пред да се започне со процесот. Прво на сите, важно е да се анализира форматот што треба да се избере за анализата на латерален проток, без разлика дали ќе биде конкурентен или сендвич формат. Во основа, упатството за развој на анализата на латерален проток зависи од процесот на развој на анализата. Првиот критичен и најважен чекор е да се идентификува контролната анализа што ќе помогне да се идентификува целната аналит во примерокот. Ова упатство за развој ќе даде општ процес на развој на LFA бидејќи различните анализи имаат и различен процес.
Првиот чекор кон развојот на водичот е изборот на наночестички. Изборот на наночестички варира по големина и облик. Достапни се различни големини за анализи на латерален проток. Исто така, тука се и 40nm златни наночестички со јаглеродна или цитратна површина кои можат понатаму да се користат за процесот на адсорпција на протеини. Другите наночестички што можат да се изберат за развој на LFA вклучуваат карбоксилно злато, нанолушпи од карбоксилно злато итн. Освен тоа, постојат и други сонди како што се целулозни зрна, обоен полистирен и флуоресцентни сонди. Позитивната страна на изборот на карбоксилни златни наночестички е тоа што за процесот на адсорпција се потребни многу помалку антитела и поради овие наночестички се формира врска што е стабилна и неповратна амидна врска. Сепак, мора да се има предвид дека добиените сили што се наоѓаат помеѓу наночестичките и антителата се должат на нивната средина за спојување.
Вториот чекор е избор на антитела. Изборот на антитела е критичен чекор бидејќи перформансите на LFAs зависат од афинитетот на антителата, кинетиката и другите стерични својства. Исто така, врзувањето на антителата е важно за откривање на резултатите. Друг важен фактор при изборот на антитела се двата вида од нив. Двата типа на антитела се моноклонални и поликлонални. Моноклоналните антитела се лесни за производство, додека поликлоналните антитела имаат релативно висока чувствителност во споредба со моноклоналните. Во чекорот на процесот на селекција на антитела, постојат уште два чекори, односно прочистување на антитела и антитела на контролната линија. Во изборот на антитела, предложеното стебло е да се испитаат антителата од причина што треба да се тестираат претходно. Антителата може да се прикажат и тестираат со изградба на многу прелиминарна и почетна верзија на анализата за страничен проток која може да работи како уред за тест -примерок. Перформансите на антителата се различни во различен вид LFA. На пример, во ELISA кинетиката не е од голема важност. И зборувајќи за анализата за страничен проток, постојат одредени услови што антителата мора да бидат способни да ги направат. Пред с all, антителата треба да бидат активни дури и откако ќе бидат конјугирани со наночестичките и нивниот структурен интегритет не треба да биде оштетен на кој било начин. Исто така, тие мора да имаат способност веднаш да ја дадат својата реакција кога примерокот повторно ќе се хидрира од примерокот. Времето на инкубација во други видови анализи е подолго во споредба со анализата за страничен проток, во која врзувањето со линијата за тестирање мора да се изврши во временски период од неколку секунди.
Третиот процес во овој процес е нитроцелулозна мембрана и тоа е многу важен дел од LFA бидејќи ги има тест и контролните линии. Нитроцелулозната мембрана има и реагенси кои работат за да ги дадат резултатите. Достапно е во различни големини, порозност и дизајн. Всушност, нитроцелулозната мембрана зависи од времето на проток на капиларите. Со време на капиларен проток, тоа значи дека времето потребно за примерокот да тече до 4см. Во овој чекор, постои уште еден чекор што се нарекува соголување на мембраната. Пуферот во кој е одреден протеин со ленти може да има значително влијание врз конечните резултати од секоја анализа на страничен проток. Иако многу протеини може да се растворат во 1x PBS, некои се исклучително чувствителни на pH, концентрација на сол и појава на стабилизатор за кој може да се именува трехалоза. Соблекувањето на мембраната е уште еден важен чекор што доаѓа со овој чекор. Во овој чекор, дизајнот на тестот за анализа на страничен проток е да го разголи тестот и да ги контролира линиите на антитела кои се присутни на нитроцелулозната мембрана. Важен фактор во овој чекор е нитроцелулозната мембрана каде што се вели дека не ја чува мембраната на нитроцелулоза на место каде што нема влага, а сето тоа е исушено. За развој на анализа за страничен проток, температурата за нитроцелулозната мембрана треба да биде влажна. Бидејќи постојат различни формати на анализи, односно конкурентен формат и сендвич формат, кои исто така се многу важни. Концентрацијата на антитела се разликува во двата формати за формат сендвич, препорачаната концентрација на антитела е 1mg/ml за само антитела за тест и контролна линија и оваа граница може да се движи до 0.5 до 2 mg/ml. Во чекорот на нитроцелулозна мембрана и водич за развој на страничен проток, друг чекор вклучен е чекорот на блокирање на мембраната. Правењето на овој чекор има многу придобивки, како што е подобрениот проток на течноста, стабилноста на тест лентите и блокирањето на неспецифичното врзување со што ги даваат вистинските резултати. За поголемиот дел од нитроцелулозната мембрана во анализата за страничен проток, постои комерцијален раствор што се додава во за да ги направи мембраните хидрофилни.
Следниот чекор е конјугираната и конјугираната подлога. За развој на анализа на страничен проток, важно е да се развијат оптимизирани параметри за конјугирање. Кога се подготвува конјугиран за анализа на страничен проток, се распределува и се суши на конјугирана подлога. За развој на стабилизирана конјугација на антитела, може да има неколку чекори. Чекорите вклучени во развојот на кохезивна и зголемена ефикасност на конјугацијата. Во овој чекор, стабилноста на конјугацијата е многу важен чекор и затоа, колоидната стабилност мора да се оптимизира при дизајнирање на LFA. колоидната стабилност е од суштинско значење за анализата на страничниот проток и затоа, при дизајнирање и оптимизирање на ЛПА, ова секогаш се зема предвид. Наночестичките од злато кои играат клучна улога во конјугацијата во LFA имаат многу уникатни оптички карактеристики со помош на кои апсорбираат и ја растураат светлината со точност и ефикасност. Силната интеракција помеѓу наночестичките и светлината се случува поради спроводливите електрони што се присутни на металната површина, што резултира со колективна осцилација кога електроните се возбудуваат од светлината со иста и еднаква фреквенција. По успешната конјугација, постојат некои ефекти врз оптичките карактеристики, бидејќи промената е забележана во индексот на прекршување, што понатаму може да се следи во спектрите на УВ-вис со разликата на црвената линија. Исто така, за третман на подлогата за конјугација, може да има различни методи. Некои од нив се потопуваат, или униформно прскаат со помош на автоматски диспензер.
После ова, се одвива процесот на избор на примерокот. Ова е првиот дел од анализата на латерален проток, затоа е важно да се провери материјалот на примерокот и претходната обработка на примерокот за неговиот проток и ефикасност. Примероците што се користат за анализата на латерален проток се од различни видови, како што се влакна, памук, синтетика итн. Исто така, е забележано дека некои примероци, како што се урина, крв итн., можат да варираат поради многу други фактори, меѓу кои се биолошки фактори, време на јадење, пиење пред земање на примерокот на уредот за анализа на латерален проток и многу други. За третирање на примерокот и негово оптимизирање, може да се користи оптимизиран пуфер, што исто така има многу предности. При развивање на анализата на латерален проток и избор на примерок, неотермизираниот пуфер може да помогне во подобрувањето на перформансите на анализата со намалување на варијабилноста на примерокот, што вклучува протеини, pH, вискозитет, концентрација на сол итн. Исто така, може да го подобри протокот и конзистентноста на анализата додека се развива. Буферите за третман се покажаа како исклучително корисни во одржувањето на протокот и конзистентноста, нормализирањето на pH вредноста, делувајќи како блокирачки агенси преку спојување на протеини, соли, сурфактанти со соодветна концентрација од секое од нив. Најважната спецификација на примерокот што треба да се провери е капацитетот на апсорпција, бидејќи тој кажува за волуменот на примерокот за тестот.
Откако ќе се избере подлогата за примерок, следува изборот на фитил. Подлогата за фитилирање помага во процесот на адсорпција на реагенсите што не биле внесени во ниту една линија, односно тест линија и контролни линии. Подлогата за фитирање, исто така, го запира протокот на течноста наназад што се користи како примерок. Се сугерира дека при изборот на материјал за подлога за отпад, материјалот мора да се провери за да се спаси уредот од какви било несогласувања што можат да доведат до проблеми, а можеби и лажни резултати. Освен вообичаеното, густиот материјал или подлогата за фитилирање не се подобри од потенкиот материјал. Потенкиот материјал е подобар во работата и обично има материјал со поголем капацитет понекогаш. Но, секој материјал мора да се провери за неговите карактеристики и нивната соодветност за развој на анализата за страничен проток. За да се избере големината и материјалот на подлогата за фитилирање, потребно е да се држи во усогласеност со факторот дека капацитетот на апсорпција мора да биде поголем и да работи пуферниот волумен.
Во анализата за страничен проток, склопот за тестирање на ленти е исто така чекор на неговиот водич за развој. Во собранието за тестирање на ленти, LFAs се собираат врз основа на големо производство или производство од мал обем. За некои типови на анализи на страничен проток, квантитативното читање може да не е услов, но формат на прачка ќе биде потребен за извршување на склопот за тестирање на ленти во LFA. Постои касета која има тест за ленти внатре е еден од најважните и клучни чекори за да се постигне анализата што е репродуктивна и исто така сигурна. Двете спецификации споменати претходно се исклучително значајни за квантитативните тестови, особено. Главната работа на касетата е да го обезбеди потребниот притисок на течноста. Ова е за да се осигура дека има оптимален проток и течноста исто така поминува низ склопот со истиот проток. Касетата, исто така, осигурува дека течноста не останува резултат на рабовите и само тече по влошките.
По склопот за тестирање на ленти, следниот чекор е извршување на анализата. Постојат различни техники за изведување на анализата, како што е дистриктна анализа во течен конјугат, целосни анализи за сушен конјугат и пуфер што работи. За анализа на лентата, мора да се знае дека тестот е квалитативен или квантитативен и мора да се избере вистинскиот метод за анализа. За анализа на анализата, може да се направи или со голо око во кое би имало да/не резултати или со снимање впечаток од тест -линијата, може да се користи скенер со рамно лежиште или камера со контролирано осветлување. Последниот чекор е оптимизација на анализата во која е вклучен изборот на вистинскиот пар на антитела, нитроцелулозна мембрана, фитил рампа, адсорбентна подлога и сите други делови.
Заклучок:
Водичот за развој на анализата на латерален проток е составен од девет до десет чекори кои мора темелно да се следат за да се создаде анализа на латерален проток.
Референци
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0257/8237/files/BioReady_Lateral_Flow_Handbook.pdf