Што може да биде причина за лажно позитивни резултати во анализата на страничниот проток?

Тестот со латерален проток (LFA) е добро воспоставена платформа за тестирање на точка на грижа (POC), а причината е неговата ниска цена и леснотијата на користење. Конвенционалните LFA даваат квалитативни или полуквантитативни резултати и бараат употреба на специјализирани инструменти за квантитативно откривање. Тестот со латерален проток (LFA) е платформа базирана на хартија за откривање и квантификација на аналити во сложени смеси. Примерокот се става на тест уред, а резултатите се прикажуваат во рок од 5-30 минути. Поради ниските трошоци за развој и леснотијата на производство на LFA, нивните примени се проширија на широк спектар на области што бараат брзо тестирање.

Течен примерок, како што се крв, серум, плазма, урина, плунка или растворени цврсти материи, се додава директно во подлогата за примерок и е злобен преку уредот за страничен проток што треба да се користи. Подлогата за примерок го неутрализира примерокот и ги филтрира непожелните честички како црвените крвни клетки. Потоа, примерокот може слободно да тече кон конјугатната подлога, која содржи високо обоени или флуоресцентни наночестички со антитело на нивната површина. Овие исушени наночестички се ослободуваат и се мешаат со примерокот кога течноста ќе достигне конјугатната подлога. Ако антителото препознае какви било аналити во примерокот, тие ќе се врзат за антителото.

Во сегашната историја , побарувачката за повеќекратни дијагностички анализи на лице место со обемни линии за тестирање што овозможуваат брзо и истовремено откривање на повеќе примероци од аналити на лице место. Ваквите анализи (потенцијално една ЛФА) треба да бидат едноставни за спроведување без помош на лабораторија или лица обучени за хемиска анализа. ЛФА се одлични кандидати бидејќи се ефтини за производство, лесни за употреба и, најважно, широко прифатени од корисниците и регулаторните органи.

И покрај тоа што анализата на страничен проток е корисен и најкористен начин за тестирање, сепак има некои дефицити и проблеми што се гледаат во Анализата за страничен проток и резултатите, конкретно. Ова е често поставувано прашање зошто се појавуваат позитивни лажни резултати во анализата на страничен проток и има различни причини за тоа во зависност од гранката на науката. Сепак, причината што лажните позитивни резултати излегуваат во Анализата за страничен проток детално се дискутира во следниот одговор. Кога се забележува тест линија во целосен недостаток на посакуваниот аналит, лажно позитивен резултат може да биде предизвикан од различни фактори, вклучувајќи неспецифично врзување, вкрстена реактивност или хетерофилни антитела.

За да се оптимизира анализата и да се отстранат лажните позитивни резултати, потребно е да се идентификува кој од овие фактори или комбинации на фактори предизвикува лажно позитивен резултат. Неспецифичното врзување се јавува кога постои неспецифична интеракција помеѓу конјугатот на антитела-наночестички и антителата на тест-линијата, без оглед дали е присутен целниот аналит или не. Неспецифичното врзување често може да се избегне со едноставно оптимизирање на постапката на конјугација за специфичен протеин. Оптимизирање на оптеретувањето со антитела / протеини (премалку или премногу антитела може да резултираат во неспецифично врзување), времето на инкубација на антителата и тампонот на реакцијата се сите аспекти на оптимизацијата на конјугацијата. Протеини, сурфактанти или полимери можат да се користат како блокирачки агенси во компонента на тест лента (на пр. Конјугиран раствор за раствор, пред-третман на подлога за примерок, пред-третман на конјугирана подлога, пуфер за работа, итн.). Крос-реактивноста се разликува од неспецифичното врзување со тоа што се јавува кога антителото ќе се поврзе со аналитот во примерокот, кој НЕ е целниот аналит. Ова е потежок проблем за решавање и обично е неопходна замена на системите за антитела кои не реагираат вкрстено со несакани аналити.

Примерок што содржи хетерофилни антитела (ендогени антитела што се врзуваат за антителата за анализа) може да даде лажно позитивен резултат. Неколку видови хетерофилни антитела можат да предизвикаат вкрстено поврзување помеѓу антителото конјугирано со наночестичката и антителото на линијата за тестирање, дури и кога целниот аналит не е присутен. Ако лажно позитивниот резултат покажува ист интензитет на сигналот дури и по разредувањето на примерокот, наместо линеарно намалување на интензитетот на сигналот, тоа може да се должи на хетерофилни антитела. Човечките антитела во примерок што комуницираат со антителата за анализа за да произведат лажно позитивни или лажно негативни резултати се нарекуваат хетерофилни антитела. Хетерофилното антитело може да се развие кај пациент како резултат на изложеност на специфични животни или животински производи, инфекција со бактериски или вирусни агенси или неспецифично. Лажно позитивен резултат од тестот може да се појави за неколку точки на лоша техника на тестирање од страна на испитаникот (на пр., густ размаз на картичка за хемокултура) и неважечко отчитување на тестот. Доцнењето во отчитувањето може да резултира и со лажно позитивен резултат, особено кога се користи тест за латекс аглутинација. Лажно позитивен резултат може да биде предизвикан и од физиолошка загуба на крв кај испитаник кој не е во нормалниот опсег.

Лажно позитивни резултати може да се појават како резултат на нарушувања на хомеостазата (на пр., нецелосно отстранување на оштетените клетки, застој на клеточниот циклус, воспаление) што може да се случи пред клеточните мембрани да бидат компромитирани и некрозата/апоптозата да биде откриена со хистопатологија. Овие последици можат да ја зголемат миграцијата на ДНК на местото на контакт, како и периферно во други ткива како што ткивото реагира на клеточно оштетување и системскиот воспалителен одговор напредува, во зависност од концентрацијата на дозата и фреквенцијата на администрација.

Заклучок

Тестот за латерален проток е едноставен, лесен за пристап и економичен, но поради различни причини што се споменати погоре, резултатите понекогаш може да се покажат како неточни. Различните и исклучителни својства на LFA помогнаа во откривањето на биомаркери на болести и инфективни агенси во медицината, земјоделството, безбедноста на храната и безбедноста на животната средина. Иако принципот на методот успеа да остане непроменет со децении, техниките на LFA постојано се подобруваат, што резултира со зголемена чувствителност и репродуктивност, како и истовремено откривање на повеќе аналити. Важно е да се напомене дека овие тестови сега можат да се вршат надвор од лабораторијата, што нуди значајни придобивки за употреба во земјите во развој и на местото на грижа, без разлика дали на терен или во поконвенционални клинички услови. Иако тестот за латерален проток може да покаже лажно позитивни и обратни резултати, може да се испробаат и тестираат други методи за поголема сигурност.

Референци
https://www.clinisciences.com/en/read/serological-tests-in-mycology-1190/lateral-flow-assay-lfa-2095.html
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0165993616300668
https://nanocomposix.com/pages/introduction-to-lateral-flow-rapid-test-diagnostics
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4986465/
https://www.abingdonhealth.com/services/what-is-lateral-flow-immunoassay/