Lateral Flow Assay Werkingsmechanisme Stap voor stap
De laterale flowtest (Lateral Flow Assay , LFA), een test met behulp van een apparaat of teststrip om de aanwezigheid of afwezigheid van een te analyseren stof in een monster te bepalen, heeft een mechanisme dat gedurende het hele testproces wordt gevolgd. Dit mechanisme zorgt ervoor dat de test werkt, de procedure correct wordt uitgevoerd en de testresultaten correct worden verkregen. Het is belangrijk om te benadrukken dat technologie alomtegenwoordig is in de medische wereld en dat de laterale flowtest daarop geen uitzondering vormt. De technologie is dus weliswaar in de laterale flowtest geïntegreerd, maar het werkingsmechanisme blijft hetzelfde. Dit is een van de redenen waarom het een van de meest gebruikte testmethoden is in zowel ontwikkelde als ontwikkelingslanden.
Om het mechanisme van de Lateral Flow Assay te begrijpen , volgt hier een kort overzicht. Allereerst is er een monsterpad waarop het monster wordt aangebracht, dat vervolgens naar het conjugaatpad gaat. Op het conjugaatpad vindt de binding plaats door de aanwezigheid van detectiedeeltjes, die van goud of latex kunnen zijn. Vervolgens binden het monster en het reactiemiddel zich aan elkaar en bewegen ze naar het reactiemembraan. Het reactiemembraan zorgt voor de resultaten. De testlijn stopt of blijft stromen tot aan het adsorptiepad. Om te controleren of de Lateral Flow Assay is geslaagd, binden de reactiemiddelen zich aan de controlelijn en produceren ze de resultaten. Het gedetailleerde mechanisme van de Lateral Flow Assay wordt hierna beschreven.
Voorbeeld Pad
Sample Pad is het begin van de laterale-flow-assaytest. De samenstelling van het monsteraanbrengkussen is glasvezel, geweven gaas of cellulose. Glasvezel, geweven gaas en cellulose hebben verschillende eigenschappen van elkaar. Ook zijn de werking en de kosten ervan afhankelijk van het type. Kortom, het monsteraanbrengkussen start de Lateral Flow Assay-test en de belangrijkste functie hiervan is om een gelijkmatige hoeveelheid van het monster of het monster te krijgen en deze te verdelen. Het is belangrijk dat het monsterkussentje het monster glad maakt, zodat het de scheiding van het monster, pH-aanpassing en binding gelijkmatig kan uitvoeren. Om de test te starten, moet het monster op het monsteraanbrengkussen worden gelegd.
Vervoeg Pad
Het conjugaatkussen is de tweede stap in het mechanisme van de laterale flow-assay. Het conjugaatvrijgavekussen bestaat uit niet-geweven glasvezels en bevat het reeds gedroogde detectiemiddel. Wanneer het monster verzadigd raakt en naar het monstervrijgavekussen stroomt, wordt het detectiemiddel vrijgegeven om het monster te analyseren. De belangrijkste functie van het conjugaatkussen is ervoor te zorgen dat het monster en het reactiemiddel naar het membraan worden getransporteerd, terwijl het conjugaat behouden blijft. In het conjugaatkussen moet er weinig niet-specifieke binding zijn om te voorkomen dat het detectiemiddel in het kussen blijft plakken.
Detectiereagens
Bij de laterale flow-assay is altijd een detectiereagens aanwezig . Dit detectiereagens bestaat uit antilichamen die gekoppeld zijn aan fluorescerende of gekleurde deeltjes. De effectiviteit van de laterale flow-assay is afhankelijk van de kwaliteit van de antilichamen en het detectiereagens.
antilichaam
De selectie van het antilichaam voor de laterale-flow-assay wordt als belangrijk beschouwd en er moeten weinig factoren in overweging worden genomen bij het selecteren van het antilichaam voor de laterale-flow-assay. De eerste factor is een betere toevoer van het antilichaam. Ten tweede moet de specificiteit van het antigeen worden gecontroleerd en gewaarborgd. Ook de keuze tussen de monoklonale of polyklonale middelen bij het maken van de keuze voor antistoffen. Monoklonalen worden aanbevolen vanwege het feit dat er een groot aantal antilichamen kan worden geproduceerd en zo helpt bij het identificeren van de enkele antigene epitoop, terwijl polycilonals het onderwerp kunnen worden van de variabiliteitsfactor en hun levering ook niet is gegarandeerd.
Nitcocellulose Membraan
Substraatmembraan of nitrocellulosemembraan is een van de belangrijkste en meest cruciale factoren bij het bepalen van de laterale-flow-assay en ook voor de gevoeligheid ervan. De testlijn en controlelijn worden over het membraan getrokken om te zorgen voor een goede binding om de antilichamen op te vangen. Niet-specifieke adsorptie op de testlijnen en controlelijnen kan de gevoeligheid van de resultaten beïnvloeden die valse resultaten kunnen opleveren.
Adsorberend Pad
Aan het einde van de strip of het laterale-flow-assay-apparaat wordt een adsorberend kussentje of een wicking-kussentje geplaatst. De doelpositie van het wicking pad kan een cellulosefilter hebben dat helpt bij het optimaliseren van de hoeveelheid monster in de teststrip. De belangrijkste functie van het adsorberende kussen is om de stroom van monstervloeistof over het nitrocellulosemembraan te regelen. Niet alleen dat, maar het stopt ook de achterwaartse stroom van het monster, waardoor de juiste hoeveelheid van het monster of monster behouden blijft.
Procesopties in het laterale-stroomassaymechanisme
Hoewel de stapsgewijze actie of het mechanisme tot in detail is uitgelegd, zijn de procesopties in de laterale stroomtest cruciaal. Er zijn twee procesopties; de ene is batchverwerking en de andere is in-line/reel-to-reel assemblage. Batchverwerking is ost-effectief en heeft personeel nodig, wat kan leiden tot variabiliteit in de resultaten, waardoor niet-betrouwbare resultaten worden verkregen. Terwijl assemblage van haspel tot haspel een machinaal verwerkte verwerkingsoptie is en betrouwbaarder voor grotere of bulkhoeveelheden. Tijdens beide soorten verwerkingsopties is het aspect van temperatuur erg belangrijk en moet het in overweging worden genomen om echte en gewenste resultaten op te leveren.
Conclusie
Het mechanisme van de laterale flow-assay bestaat uit een aantal onderdelen, waaronder pads, membranen en bepaalde deeltjes die helpen bij het detecteren van het monster en het produceren van resultaten. Hoewel er verschillende laterale flow-assay-apparaten bestaan, waarvan sommige technologisch geavanceerd zijn en andere niet, blijft het mechanisme hetzelfde. Alle factoren in het mechanisme van de laterale flow-assay moeten als belangrijk worden beschouwd en mogen nooit over het hoofd worden gezien.
Referenties
https://www.creative-diagnostics.com/Immunochromatography-guide.htm
https://fnkprddata.blob.core.windows.net/domestic/download/pdf/IBS_A_guide_to_lateral_flow_immunoassays.pdf
https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/lateral-flow-test