Wat zorgt ervoor dat antilichamen op de laterale flow-assay van nitrocellulosemembraan blijven?
Nitrocellulosemembraan in de Laterale stroom De test komt na het monster en het geconjugeerde kussentje. Nitrocellulosemembraan wordt ook wel substraatmembraan genoemd en het is een van de meest cruciale en gevoelige onderdelen voor de resultaten van de test die op de Laterale stroomtest As. In de laterale stroomassay kunnen verschillende materialen worden gebruikt, zoals celluloseacetaat, polyvinylideenfluoride (PVDF), ladingsgemodificeerd nylon en polyethersulfon (PES), enz. In het nitrocellulosemembraan is er een verschillende poriegrootte, porositeit, dikte , en chemische behandeling. Nitrocellulosemembranen hebben geen gelijke verdeling van poriën, daarom heeft de capillaire stroomtijd meer de voorkeur. Alvorens verder in te gaan op de redenering is het belangrijk om te weten wat de capillaire stroming is. In principe wordt de capillaire stroomtijd gemeten in seconden of centimeters en is het de totale tijd die het monster nodig had om de teststrip of het laterale stroomassay-apparaat volledig te vullen.
Nitrocellulosemembraan fungeert als een dragerlichaam voor de antilichamen op het laterale stroomtestapparaat. Ze worden ook gebruikt voor het screenen van verschillende processen en soorten antilichamen, dwz monoklonale stoffen, en dit gebeurt als gevolg van de wijziging van de enzymoimmounoassay.
Op de nitrocellulose membraan, de antilichamen blijven en conjugeren met de biologische deeltjes, ofwel latex- of gouddeeltjes. De antilichamen mogen niet bewegen en worden om verschillende redenen geïmmobiliseerd op het nitrocellulosemembraan. Omdat er testlijnen en controlelijnen zijn op de laterale flow-assay, zitten de antilichamen tussen deze twee lijnen. Gezien de testlijn wordt deze gebruikt om het monstereiwit te binden, terwijl de controlelijn de soortspecifieke antilichamen heeft die worden gebruikt om de antilichamen in het monster verder te detecteren. Een andere reden dat de antilichamen op het nitrocellulosemembraan blijven, is de poriegrootte van de rugfilm. De niet-poreuze steunfilm van het nitrocellulosemembraan laat de antilichamen niet afglijden, maar ze worden stevig vastgehouden en blijven dus op het membraan. Dit helpt ook bij het verminderen van variabiliteit.
Andere belangrijke factoren die ervoor zorgen dat de antilichamen op het nitrocellulosemembraan blijven zitten, zijn de keuze van het antilichaamverdunningsmiddel, de droogmethode, de concentratie van de vangantilichamen en de snelheid waarmee het reagens wordt toegevoegd. Goed drogen is essentieel om ervoor te zorgen dat de vangantilichamen zich aan het membraan hechten; membranen met een drager hebben echter aanzienlijk meer tijd nodig om te drogen dan membranen zonder drager. Naast de complexiteit, de zorgen van de gebruiker, de monstervoorbereiding, het onderhoud, de reproduceerbaarheid en de gebruiksvriendelijke interpretatie van de resultaten, moet er altijd voor worden gezorgd dat de gespecificeerde parameters gevoelig worden gedetecteerd. Sommige van deze normen, zoals de interpretatie van de resultaten en de gevoeligheid, zijn sterk afhankelijk van de immobilisatie en ruimtelijke retentie van de detectiemiddelen binnen de parameters van het testgebied.
Een andere benadering die nuttig is om ervoor te zorgen dat antilichamen op het nitrocellulosemembraan blijven, is de covalente hechting van de antilichamen aan het membraan van de laterale-stroomassay. Ook duidt de niet-covalente immobilisatie van de antilichamen op het nitrocellulosemembraan van LFA op het zeer sterke vermogen van de nitrocellulosemembranen om er antilichamen op te binden. Zoals eerder vermeld, zijn er in de Lateral Flow Assay deeltjes die gevoelig en cruciaal zijn voor het testen van het monster. Door dit te koppelen aan de colloïdale gouddeeltjes, is bewezen dat ze ervoor zorgen dat de antigenen op het cellulosemembraan blijven. In dit proces is de eerste stap de passieve adsorptie van het vereiste antilichaam op het oppervlak van het nanodeeltje van colloïdaal goud. Dit is een van de meest uitdagende in de laterale flow-assay. Hiervoor zijn de conjugatiedeeltjes gemaakt die ervoor zorgen dat de antilichamen, moleculen en andere elementen gemakkelijk op het nitrocellulosemembraan blijven.
Dit biedt ook de gemakkelijke bevestiging en coating van de antilichamen op het oppervlak, inclusief andere analyten en zelfs biomoleculen. Afgezien daarvan zijn de latexkorrels in de laterale stroomtest ook nuttig om ervoor te zorgen dat antilichamen op het nitrocellulosemembraan blijven. Passieve conjugatie kan ook helpen om antilichamen op het nitrocellusmembraan van de laterale-stroomtesttest te laten blijven. Hoewel deze processen en oorzaken ervoor kunnen zorgen dat antilichamen op het nitrocellulosemembraan van de laterale-flow-assay blijven, zijn het tijdrovende en zeer lange processen. Niet alleen dit, maar het vereist ook grote apparatuur en andere dingen die het hectisch en zeer duur. Sommige oorzaken vereisen ook de actieve optimalisatie van de pH en dit is een uitgebreide zaak, daarom zijn er nieuwe methodologieën en processen opgenomen in het Lateral Flow Assay-apparaat dat leidt tot het gebruik van andere methoden. Een aantal antilichamen worden specifiek geïmmobiliseerd op nitrocellulose door fysieke absorptie. Met diepe wortels in onderzoek, kunnen de antilichamen ook op het nitrocellulosemembraan blijven vanwege de specifieke hydrofobe en dipolaire interactie tussen beide eiwitdomeinen en nitrocellulose, wat resulteert in het behoud van de oriëntatie van antilichamen.
Conclusie
Om het af te sluiten en samen te vatten in het licht van de bovenstaande beschrijving, is nitrocellulose een belangrijk onderdeel van de laterale stroomtest en het apparaat dat voor het testen wordt gebruikt. Een van de belangrijkste en meest vitale factoren die de laterale-flow-assay en de gevoeligheid ervan bepalen, is het substraatmembraan of Nitcocellulose Membraan. De test- en controlelijnen worden over het membraan getrokken om een goede binding en opname van de antilichamen te verzekeren. Niet-specifieke adsorptie op de test- en controlelijnen kan de gevoeligheid van de resultaten beïnvloeden, wat resulteert in foutieve resultaatwaarden. Aangezien nitrocellulose een van de onderdelen is van de laterale stroomtest waaruit het monster wordt gehaald. Van het monster conjugeren de antilichamen en antigene delen van zowel het monster als het hulpmiddel met elkaar en gaan door naar het volgende deel. Van daaruit stroomt het monster naar het nitrocellulosemembraan dat vervolgens de antilichamen en antigenen opneemt die nodig zijn voor het testen. De eigenschappen en de redenen die ervoor zorgen dat antigeen op het nitrocellulosemembraan blijft, zijn hierboven in detail beschreven, waardoor het onderwerp van het papier wordt afgedekt.
Referenties
https://www.creative-diagnostics.com/Immunochromatography-guide.htm
https://fnkprddata.blob.core.windows.net/domestic/download/pdf/IBS_A_guide_to_lateral_flow_immunoassays.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6350463/
https://www.bakerlab.org/wp-content/uploads/2015/12/Holstien_Anal_Bioanal_Chem_2015.pdf
https://www.nature.com/articles/s41598-021-87072-7
https://www.researchgate.net/topic/Nitrocellulose