Čo vedie k tomu, že protilátky zostávajú pri teste laterálneho prietoku nitrocelulózovou membránou?

Nitrocelulózová membrána v Bočný prietok Test nasleduje po vzorke a konjugátovom tampóne. Nitrocelulózová membrána sa nazýva aj substrátová membrána a je jednou z najdôležitejších a najcitlivejších častí z hľadiska výsledkov testu vykonaného na Test laterálneho toku. V skúške laterálneho toku môžu byť použité rôzne materiály, ako je acetát celulózy, polyvinylidénfluorid (PVDF), nylon modifikovaný nábojom a polyétersulfón (PES) atď. V membráne z nitrocelulózy je rozdielna veľkosť pórov, pórovitosť, hrúbka a chemické ošetrenie. Nitrocelulózové membrány nemajú rovnaké rozdelenie pórov, preto je výhodnejší čas kapilárneho toku. Predtým, ako sa pohneme ďalej k úvahám, je dôležité vedieť o kapilárnom toku. Čas kapilárneho prietoku sa v zásade meria v sekundách alebo centimetroch a je to celkový čas, ktorý vzorka potrebovala na úplné naplnenie testovacím prúžkom alebo zariadením na test laterálneho prietoku.

Nitrocelulózová membrána funguje ako nosný orgán pre protilátky v zariadení na testovanie laterálneho prietoku. Používajú sa tiež na skríning rôznych procesov a typov protilátok, tj. Monoklonálnych, a k tomu dochádza v dôsledku modifikácie enzymoimunotestu.

na nitrocelulózová membránaprotilátky zostanú a konjugujú sa s biologickými časticami, buď s latexovými alebo zlatými časticami. Protilátky sa nemôžu pohybovať a sú imobilizované na nitrocelulózovej membráne z rôznych dôvodov. Pretože v teste laterálneho toku sú testovacie a kontrolné čiary, protilátky sú uviaznuté medzi týmito dvoma čiarami. Pokiaľ ide o testovaciu čiaru, používa sa na väzbu proteínu vzorky, zatiaľ čo kontrolná línia obsahuje druhovo špecifické protilátky, ktoré sa používajú na ďalšiu detekciu protilátok vo vzorke. Ďalším dôvodom, prečo protilátky zostávajú na nitrocelulózovej membráne, je veľkosť pórov podkladovej fólie. Neporézny podkladový film nitrocelulózovej membrány neumožňuje protilátkam skĺznuť, skôr sa s nimi tesne manipuluje a tak zostávajú na membráne. To tiež pomáha znižovať variabilitu.

Ďalšími dôležitými faktormi, ktoré spôsobujú, že protilátky zostanú na nitrocelulózovej membráne, sú výber riedidla protilátok, spôsob sušenia, koncentrácia zachytávacích protilátok a rýchlosť dávkovania činidla. Správne sušenie je potrebné na zabezpečenie toho, aby sa zachytávacie protilátky prichytili na membránu; napriek tomu membrány s podkladovou vrstvou schnú podstatne dlhšie v porovnaní s membránami bez podkladovej vrstvy. Okrem zložitosti, obáv používateľa, prípravy vzoriek, údržby, reprodukovateľnosti a užívateľsky prívetivej interpretácie výsledkov by sa malo vždy zabezpečiť citlivá detekcia špecifikovaných parametrov. Niektoré z týchto štandardov, ako napríklad interpretácia výsledkov a citlivosť, sú silne pripísateľné imobilizácii detekčných činidiel a ich priestorovej retencii s parametrami testovacej oblasti.

Ďalší prístup, ktorý je nápomocný pri zaistení pobytu protilátok na nitrocelulózovej membráne, je kovalentné prichytenie protilátok k membráne testu laterálneho toku. Tiež nekovalentná imobilizácia protilátok na nitrocelulózovej membráne LFA naznačuje veľmi silnú kapacitu nitrocelulózových membrán viazať na ňu protilátky. Ako je uvedené vyššie, v teste laterálneho toku sú častice, ktoré sú citlivé a rozhodujúce pre testovanie vzorky. V spojení s časticami koloidného zlata dokázali, že antigény zostanú na celulózovej membráne. V tomto procese je prvým krokom pasívna adsorpcia protilátky potrebná na povrchu nanočastíc koloidného zlata. Toto je jeden z najnáročnejších v teste laterálneho toku. Na tento účel boli vytvorené konjugačné častice, ktoré ľahko prinútia protilátky, molekuly a ďalšie prvky zostať na nitrocelulózovej membráne.

To tiež ponúka ľahké prichytenie a potiahnutie protilátok na povrch vrátane ďalších analytov a dokonca biomolekúl. Latexové guľôčky v teste laterálneho toku sú tiež nápomocné pri vytváraní protilátok na nitrocelulózovej membráne. Pasívna konjugácia môže tiež pomôcť zaistiť, aby protilátky zostali na nitrocelóznej membráne testu bočného prietoku. Aj keď tieto procesy a príčiny môžu spôsobiť, že protilátky zostanú na nitrocelulózovej membráne testu laterálneho toku, sú časovo náročné a veľmi dlhé procesy. Nielen to, ale vyžaduje si to aj veľké vybavenie a ďalšie veci, vďaka ktorým je tento proces veľmi hektický a veľmi nákladné. Niektoré príčiny tiež vyžadujú aktívnu optimalizáciu pH, a to je rozsiahla vec, preto boli do zariadenia Lateral Flow Assay začlenené nové metodiky a postupy, ktoré vedú k použitiu iných metód. Niekoľko protilátok je špecificky imobilizovaných na nitrocelulóze fyzickou absorpciou. S hlbokými koreňmi vo výskume môžu protilátky tiež zostať na nitrocelulózovej membráne kvôli špecifickej hydrofóbnej a dipolárnej interakcii medzi oboma proteínovými doménami a nitrocelulózou, čo má za následok zachovanie orientácie protilátok.

Záver

Na záver a zhrnutie vo svetle vyššie uvedeného opisu je nitrocelulóza dôležitou súčasťou testu priečneho toku a zariadenia používaného na testovanie. Jedným z najdôležitejších a najdôležitejších faktorov, ktoré určujú test laterálneho toku a jeho citlivosť, je substrátová membrána alebo Nitcocelulózová membrána. Testovacie a kontrolné čiary sa natiahnu cez membránu, aby sa zaistila dobrá väzba a zachytenie protilátok. Nešpecifická adsorpcia na testovacích a kontrolných líniách môže ovplyvniť citlivosť výsledkov, čo má za následok nesprávne hodnoty výsledkov. Pretože nitrocelulóza je jednou z častí testu laterálneho toku, z ktorého sa odoberá vzorka. Zo vzorky sa protilátky a antigénne časti vzorky a zariadenia navzájom konjugujú a prechádzajú do ďalšej časti. Odtiaľ vzorka prúdi na nitrocelulózovú membránu, ktorá následne prijíma protilátky a antigény potrebné na testovanie. Vlastnosti a dôvody, ktoré spôsobujú pobyt antigénu na nitrocelulózovej membráne, boli opísané podrobne vyššie, a tak pokrývajú predmet článku.

Referencie
https://www.creative-diagnostics.com/Immunochromatography-guide.htm
https://fnkprddata.blob.core.windows.net/domestic/download/pdf/IBS_A_guide_to_lateral_flow_immunoassays.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6350463/
https://www.bakerlab.org/wp-content/uploads/2015/12/Holstien_Anal_Bioanal_Chem_2015.pdf
https://www.nature.com/articles/s41598-021-87072-7
https://www.researchgate.net/topic/Nitrocellulose