bočný tok test (LFA) je dobre zavedená platforma pre testovanie na mieste starostlivosti (POC) a dôvodom sú jeho nízke náklady a jednoduché použitie. Konvenčné LFA prinášajú kvalitatívne alebo semikvantitatívne výsledky a vyžadujú použitie špeciálnych nástrojov na kvantitatívnu detekciu . The test bočného prietoku (LFA) je papierová platforma na detekciu a kvantifikáciu analytov v komplexných zmesiach. Vzorka sa umiestni na testovacie zariadenie a výsledky sa zobrazia do 5 až 30 minút. Vzhľadom na nízke náklady na vývoj a jednoduchosť výroby LFA sa ich aplikácie rozšírili do širokého spektra oblastí vyžadujúcich rýchle testovanie.
Tekutá vzorka, ako je krv, sérum, plazma, moč, sliny alebo solubilizované tuhé látky, sa pridá priamo do vzorkovacej podložky a nasaje sa cez zariadenie na laterálne prúdenie, ktoré sa má použiť. Vložka na vzorky neutralizuje vzorku a odfiltruje nežiaduce častice, ako sú červené krvinky. Vzorka potom môže voľne prúdiť do podložky konjugátu, ktorá obsahuje vysoko sfarbené alebo fluorescenčné nanočastice s protilátkou na povrchu. Tieto sušené nanočastice sa uvoľnia a zmiešajú so vzorkou, keď sa kvapalina dostane do podložky konjugátu. Ak protilátka rozpozná akékoľvek cieľové analyty vo vzorke, naviažu sa na protilátku.
Došlo k zvýšeniu dopytu po bod záujmu viac diagnostických testov s rozsiahlymi testovacími linkami, ktoré umožňujú rýchlu a súčasnú detekciu viacerých vzoriek bodu starostlivosti o analyty v súčasnej histórii. Také testy (potenciálne jedna LFA) by sa mali vykonávať jednoducho bez pomoci laboratória alebo osôb vyškolených v chemickej analýze. LFA sú vynikajúci kandidáti, pretože sú lacné na výrobu, ľahko sa používajú a čo je najdôležitejšie, široko akceptované používateľmi a regulačnými úradmi.
Aj keď je test laterálneho prietoku prospešný a najpoužívanejší spôsob testovania, v teste laterálneho toku a jeho výsledkoch sú konkrétne určité nedostatky a problémy. Toto je často kladená otázka, prečo sa vyskytujú pozitívne falošné výsledky v teste laterálneho prietoku a existujú rôzne dôvody v závislosti od odboru vedy. Dôvod, prečo v teste laterálneho toku vychádzajú falošne pozitívne výsledky, je však podrobne prediskutovaný v nasledujúcej odpovedi. Keď je testovaná línia pozorovateľná v úplnom nedostatku požadovaného analytu, falošne pozitívny výsledok môže byť spôsobený rôznymi faktormi, vrátane nešpecifickej väzby, krížovej reaktivity alebo heterofilných protilátok.
Na optimalizáciu testu a elimináciu falošne pozitívnych výsledkov je potrebné identifikovať, ktorý z týchto faktorov alebo kombinácie faktorov spôsobuje falošne pozitívny výsledok. Nešpecifická väzba nastáva, ak existuje nešpecifická interakcia medzi konjugátom protilátka-nanočastice a protilátkou v testovacej línii, bez ohľadu na to, či je cieľový analyt prítomný alebo nie. Nešpecifickej väzbe sa dá často vyhnúť jednoduchou optimalizáciou konjugačného postupu pre špecifický proteín. Optimalizácia nanášania protilátky/proteínu (príliš málo alebo príliš veľa protilátky môže viesť k nešpecifickej väzbe), doba inkubácie protilátky a reakčný pufer sú všetky aspekty optimalizácie konjugácie. Bielkoviny, povrchovo aktívne látky alebo polyméry môžu byť použité ako blokovacie činidlá v zložke testovacieho prúžku (napr. Riedidlo konjugátu, predbežné ošetrenie vankúšika so vzorkou, predbežné ošetrenie konjugátovým vankúšikom, tečúci pufer, atď.). Krížová reaktivita sa líši od nešpecifickej väzby v tom, že nastáva, keď sa protilátka viaže na analyt vo vzorke, ktorá NIE je cieľovým analytom. Toto je ťažšie riešiteľný problém a zvyčajne si vyžaduje výmenu protilátkových systémov, ktoré nereagujú skrížene s nechcenými analytmi.
Vzorka obsahujúca heterofilné protilátky (endogénne protilátky, ktoré sa viažu na testované protilátky) môžu spôsobiť falošne pozitívny výsledok. Niekoľko typov heterofilných protilátok môže skončiť spôsobením zosieťovania medzi protilátkou konjugovanou s nanočasticou a protilátkou v testovacej línii, aj keď cieľový analyt nie je prítomný. Ak falošne pozitívny výsledok ukazuje rovnakú intenzitu signálu aj po zriedení vzorky, a nie lineárny pokles intenzity signálu, môže to byť spôsobené heterofilnými protilátkami. Ľudské protilátky vo vzorke, ktoré interagujú s testovacími protilátkami za vzniku falošne pozitívnych alebo falošne negatívnych výsledkov, sa označujú ako heterofilné protilátky. Heterofilná protilátka sa môže u pacienta vyvinúť v dôsledku expozície konkrétnym zvieratám alebo živočíšnym produktom, infekcie bakteriálnymi alebo vírusovými činidlami alebo nešpecificky. Falošne pozitívny výsledok testu môže nastať v niekoľkých bodoch tej zlej testovacej techniky screenee (napr. Hrubý náter na Haemoccult karte) a neplatné testovacie čítanie. Oneskorené čítanie môže tiež mať za následok falošne pozitívny výsledok, najmä pri použití testu latexovej aglutinácie. Falošne pozitívny výsledok môže byť tiež spôsobený fyziologickou stratou krvi u subjektu, ktorý nie je v normálnom rozmedzí.
Falošne pozitívne výsledky sa môžu vyskytnúť v dôsledku narušenia homeostázy (napr. Neúplná oprava excízie, zastavenie bunkového cyklu, zápal), ku ktorému môže dôjsť pred bunkové membrány sú ohrozené a nekróza/apoptóza je detegovateľná histopatológiou. Tieto dôsledky môžu zvýšiť migráciu DNA v mieste kontaktu, ako aj periférne v iných tkanivách, pretože tkanivo reaguje na poškodenie buniek a systémová zápalová odpoveď postupuje v závislosti od koncentrácie dávky a frekvencie podávania.
test bočného prietoku je jednoduchý, ľahko dostupný a ekonomický, ale z rôznych dôvodov, ktoré sú uvedené vyššie, môžu byť výsledky niekedy nepravdivé. Výrazné a výnimočné vlastnosti LFA pomohli pri detekcii biomarkerov chorôb a infekčných agensov v medicíne, poľnohospodárstve, bezpečnosti potravín a bezpečnosti životného prostredia. Aj keď sa princíp metódy dokázal udržať nezmenený po celé desaťročia, techniky LFA sa neustále zlepšovali, čo viedlo k zvýšeniu citlivosti a reprodukovateľnosti, ako aj k súčasnej detekcii viacerých analytov. Dôležité je, že tieto testy je teraz možné vykonávať mimo laboratória, čo ponúka značné výhody pri použití v rozvojových krajinách a v mieste starostlivosti, či už v teréne alebo v konvenčnejších klinických zariadeniach. Aj keď test laterálneho prietoku môže vykazovať falošne pozitívne výsledky a naopak, na zaistenie istoty je možné vyskúšať a testovať aj iné metódy.
Referencie
https://www.clinisciences.com/en/read/serological-tests-in-mycology-1190/lateral-flow-assay-lfa-2095.html
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0165993616300668
https://nanocomposix.com/pages/introduction-to-lateral-flow-rapid-test-diagnostics
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4986465/
https://www.abingdonhealth.com/services/what-is-lateral-flow-immunoassay/
