Шта би могао бити разлог лажно позитивних резултата у тесту бочног протока?

Тест латералног протока (LFA) је добро успостављена платформа за тестирање на месту неге (POC), а разлог је његова ниска цена и једноставност употребе. Конвенционални LFA дају квалитативне или полуквантитативне резултате и захтевају употребу специјализованих инструмената за квантитативно откривање. Тест латералног протока (LFA) је платформа заснована на папиру за детекцију и квантификацију аналита у сложеним смешама. Узорак се ставља на уређај за тестирање, а резултати се приказују у року од 5–30 минута. Због ниских трошкова развоја и лакоће производње LFA, њихова примена се проширила на широк спектар области које захтевају брзо тестирање.

Течни узорак, попут крви, серума, плазме, урина, пљувачке или растворене чврсте супстанце, додаје се директно у подлогу за узорке и упија помоћу уређаја за бочни проток који ће се користити. Јастучић за узорак неутралише узорак и филтрира нежељене честице попут црвених крвних зрнаца. Узорак тада може слободно да тече до коњугованог јастучића, који садржи високо обојене или флуоресцентне наночестице са антителом на површини. Ове осушене наночестице се ослобађају и мешају са узорком када течност дође до коњугованог јастучића. Ако антитело препозна било који циљани аналит у узорку, они ће се везати за антитело.

У скоријој историји дошло је до повећања потражње за вишеструким дијагностичким тестовима на месту неге са опсежним линијама тестирања које омогућавају брзо и истовремено откривање више аналита у узорцима на месту неге. Такви тестови (потенцијално један ЛФА) требало би да буду једноставни за извођење без помоћи лабораторије или појединаца обучених за хемијску анализу. ЛФА су одлични кандидати јер су јефтини за производњу, једноставни за употребу и, што је најважније, широко прихваћени од стране корисника и регулаторних тела.

Иако је тест бочног протока користан и најчешће коришћен начин тестирања, ипак постоје неки недостаци и проблеми који се виде у тесту латералног протока и резултатима, посебно. Ово је често постављано питање зашто се јављају позитивни лажни резултати у тесту латералног тока и за то постоје различити разлози, зависно од гране науке. Међутим, разлог због којег лажно позитивни резултати излазе у тесту латералног тока детаљно је размотрен у следећем одговору. Када се тест линија уочи у крајњем недостатку жељеног аналита, лажно позитиван резултат може бити узрокован различитим факторима, укључујући неспецифично везивање, унакрсну реактивност или хетерофилна антитела.

Да би се оптимизовао тест и елиминисали лажно позитивни резултати, потребно је идентификовати који од ових фактора или комбинација фактора изазива лажно позитиван резултат. Неспецифично везивање се јавља када постоји неспецифична интеракција између коњугата антитело-наночестица и антитела на испитној линији, без обзира да ли је циљни аналит присутан или не. Неспецифично везивање се често може избећи једноставном оптимизацијом поступка коњугације за одређени протеин. Оптимизација оптерећења антитела/протеина (премало или превише антитела може довести до неспецифичног везивања), време инкубације антитела и реакциони пуфер су сви аспекти оптимизације коњугације. Протеини, тензиди или полимери могу се користити као средства за блокирање у компоненти тест траке (нпр. Разблаживач коњугата, предтретман јастучића за узорке, предтретман коњугата, пуфер за рад итд.). Унакрсна реактивност се разликује од неспецифичног везивања по томе што се јавља када се антитело веже за аналит у узорку који НИЈЕ циљни аналит. Ово је теже решити проблем и обично захтева замену система антитела која не реагују унакрсно са нежељеним аналитима.

Узорак који садржи хетерофилна антитела (ендогена антитела која се везују за тест антитела) може произвести лажно позитиван резултат. Неколико врста хетерофилних антитела може на крају изазвати умрежавање између антитела коњугованог са наночестицом и антитела на тест линији, чак и када циљни аналит није присутан. Ако лажно позитиван резултат показује исти интензитет сигнала чак и након разблаживања узорка, уместо линеарног смањења интензитета сигнала, то би могло бити због хетерофилних антитела. Људска антитела у узорку која интерагују са тест антителима и производе лажно позитивне или лажно негативне резултате називају се хетерофилним антителима. Хетерофилно антитело се може развити код пацијента као резултат излагања одређеним животињама или животињским производима, инфекције бактеријским или вирусним агенсима или неспецифично. Лажно позитиван резултат теста може се јавити из неколико разлога, услед лоше технике тестирања од стране испитаника (нпр. дебели размаз на Haemoccult картици) и неважећег очитавања теста. Одложено очитавање такође може довести до лажно позитивног резултата, посебно када се користи тест латекс аглутинације. Лажно позитиван резултат може бити узрокован и физиолошким губитком крви код испитаника који није у границама нормале.

Лажно позитивни резултати могу се јавити као резултат поремећаја хомеостазе (нпр. непотпуна ексцизиона поправка, застој ћелијског циклуса, упала) који се могу догодити пре него што су ћелијске мембране угрожене и некроза/апоптоза се може детектовати хистопатологијом. Ове последице могу повећати миграцију ДНК на месту контакта, као и периферно у другим ткивима како ткиво реагује на ћелијско оштећење и системски инфламаторни одговор напредује, у зависности од концентрације дозе и учесталости примене.

Закључак

Тест латералног протока је једноставан, лако доступан и економичан, али због различитих разлога који су горе наведени, резултати понекад могу бити нетачни. Посебна и изузетна својства ЛФА помогла су у откривању биомаркера болести и инфективних агенаса у медицини, пољопривреди, безбедности хране и безбедности животне средине. Иако је принцип методе успео да остане непромењен деценијама, ЛФА технике су се континуирано побољшавале, што је резултирало повећаном осетљивошћу и репродуктивношћу, као и истовременим откривањем више аналита. Важно је напоменути да се ови тестови сада могу изводити ван лабораторије, што нуди значајне предности за употребу у земљама у развоју и на месту пружања неге, било на терену или у конвенционалнијим клиничким окружењима. Иако тест латералног протока може показати лажно позитивне и обрнуто резултате, друге методе се могу испробати и тестирати ради поузданости.

Референце
https://www.clinisciences.com/en/read/serological-tests-in-mycology-1190/lateral-flow-assay-lfa-2095.html
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0165993616300668
https://nanocomposix.com/pages/introduction-to-lateral-flow-rapid-test-diagnostics
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4986465/
https://www.abingdonhealth.com/services/what-is-lateral-flow-immunoassay/