Шта чини антитела да остану на тесту бочног протока кроз мембрану нитроцелулозе?

Нитроцелулозна мембрана у Латерал Флов Тест следи након узорка и коњугованог јастучића. Нитроцелулозна мембрана назива се и супстратна мембрана и један је од најважнијих и најосетљивијих делова према резултатима испитивања спроведеног на Тест латералног тока. У тесту бочног протока могли су се користити различити материјали, попут целулозног ацетата, поливинилиден флуорида (ПВДФ), најлона модификованог набојем и полиетерсулфона (ПЕС) итд. У нитроцелулозној мембрани постоје различите величине пора, порозност, дебљина , и хемијски третман. Нитроцелулозне мембране немају једнаку дистрибуцију пора, па је време капиларног протока пожељније. Пре него што пређемо даље на закључивање, важно је знати о капиларном току. У основи, време капиларног протока мери се у секундама или центиметрима и то је укупно време потребно за потпуни узорак узорка у тест траци или на уређају за испитивање бочног протока.

Нитроцелулозна мембрана делује као носач антитела на уређају за испитивање латералног тока. Такође се користе у сврху скрининга различитих процеса и типова антитела, односно моноклонских, а то се догађа као резултат модификације ензимско -имунолошког теста.

На нитроцелулозна мембрана, антитела остају и коњугују са биолошким честицама или честицама латекса или злата. Антителима није дозвољено кретање и имобилизована су на нитроцелулозној мембрани из различитих разлога. Пошто на тесту латералног тока постоје тест линије и контролне линије, антитела су заглављена између ове две линије. С обзиром на тест линију, користи се за везивање узорка протеина, док контролна линија има антитела специфична за врсту која се користе за даље откривање антитела у узорку. Још један разлог зашто антитела остају на нитроцелулозној мембрани је величина пора подложног филма. Непорозни заштитни филм нитроцелулозне мембране не дозвољава антителима да склизну, већ се њима чврсто рукује и тако остају на мембрани. Ово такође помаже у смањењу варијабилности.

Други важни фактори који узрокују да антитела остану на нитроцелулозној мембрани су избор разблаживача антитела, метод сушења, концентрација антитела за хватање и брзина дозирања реагенса. Правилно сушење је неопходно како би се осигурало да се антитела за хватање причврсте за мембрану; ипак, мембранама са подлогом је потребно знатно више времена да се осуше у поређењу са мембранама без подлоге. Поред сложености, забринутости корисника, припреме узорка, одржавања, репродуктивности и једноставног тумачења резултата, увек треба осигурати осетљиву детекцију одређених параметара. Неки од ових стандарда, као што су тумачење резултата и осетљивост, у великој мери се могу приписати имобилизацији агенаса за детекцију и њиховом просторном задржавању у односу на параметре подручја тестирања.

Други приступ који помаже да антитела остану на нитроцелулозној мембрани је ковалентно везивање антитела на мембрану Латерал Флов Ассаи. Такође, нековалентна имобилизација антитела на нитроцелулозној мембрани ЛФА наговештава веома јак капацитет нитроцелулозних мембрана у везивању антитела за њу. Као што је горе поменуто, у тесту латералног протока постоје честице које су осетљиве и кључне за испитивање узорка. Повезујући ово са колоидним честицама злата, показало се да антигени остају на целулозној мембрани. У овом процесу, први корак је пасивна адсорпција антитела потребна на површини наночестице колоида злата. Ово је један од најизазовнијих тестова латералног тока. У ту сврху су створене честице коњугације које лако чине да антитела, молекули и други елементи остану на нитроцелулозној мембрани.

Ово такође нуди лако причвршћивање и наношење антитела на површину, укључујући друге аналите, па чак и биомолекуле. Осим тога, перлице од латекса у тесту бочног тока такође су од помоћи у задржавању антитела на нитроцелулозној мембрани. Такође, пасивна коњугација такође може помоћи да антитела остану на нитроцелуларној мембрани теста теста бочног тока. Иако ови процеси и узроци могу узроковати да антитијела остану на нитроцелулозној мембрани Латерал Флов Есеја, они одузимају вријеме и врло су дуготрајни процеси Не само то, већ захтијевају велику опрему и друге ствари које га чине ужурбаним и врло скуп. Такође, неки узроци захтевају активну оптимизацију пХ и ово је опсежна ствар, па су нове методе и процеси уграђени у уређај за испитивање латералног протока што доводи до употребе других метода. Неколико антитела је специфично имобилизовано на нитроцелулози физичком апсорпцијом. Са дубоким коренима у истраживању, антитела такође могу остати на нитроцелулозној мембрани због специфичне хидрофобне и диполарне интеракције између оба протеинска домена и нитроцелулозе, што резултира очувањем оријентације антитела.

Закључак

Да закључимо и резимирамо у светлу горњег описа, нитроцелулоза је важан део теста бочног протока и уређај који се користи за тестирање. Један од најважнијих и виталних фактора који одређују Тест латералног тока и његову осетљивост је Субстратна мембрана или Ниткоцелулозна мембрана. Тестне и контролне линије се повлаче преко мембране како би се осигурало добро везивање и хватање антитела. Неспецифична адсорпција на испитним и контролним линијама може утицати на осетљивост резултата, резултирајући лажним вредностима резултата. Пошто је нитроцелулоза један од делова теста бочног тока из којег се пропушта узорак. Из узорка, антитела и антигени делови узорка и уређаја коњугирају једни с другима и прелазе на следећи део. Одатле узорак тече до нитроцелулозне мембране која последично узима антитела и антигене потребне за тестирање. Својства и разлози због којих се задржава антиген на нитроцелулозној мембрани описани су у детаље горе, покривајући тако тему рада.

Референце
https://www.creative-diagnostics.com/Immunochromatography-guide.htm
https://fnkprddata.blob.core.windows.net/domestic/download/pdf/IBS_A_guide_to_lateral_flow_immunoassays.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6350463/
https://www.bakerlab.org/wp-content/uploads/2015/12/Holstien_Anal_Bioanal_Chem_2015.pdf
https://www.nature.com/articles/s41598-021-87072-7
https://www.researchgate.net/topic/Nitrocellulose