Stiùireadh Leasachaidh Assay Flow Assay
’S e inneal a thathas a’ cleachdadh ann an Deuchainn Sruthadh Taobhach airson deuchainnean luath aig an taigh agus cuideachd airson deuchainnean clionaigeach. ’S iad na h-innealan as earbsaiche agus as cruinne a thathas a’ cleachdadh anns cha mhòr a h-uile dùthaich leasaichte agus fo leasachadh. Cuideachd, tha faisg air 10 ceumannan anns an Stiùireadh Leasachaidh Deuchainn Sruthadh Taobhach a tha a’ dearbhadh pròiseas leasachaidh Deuchainn Sruthadh Taobhach. Mar as trice, bidh pada sampall, pada conjugáit, membran nitrocellulose, pada adsorbent bileagan, agus bufair aig Deuchainnean Sruthadh Taobhach. Ach, dh’ fhaodadh gum bi cuid de dh’ atharrachaidhean anns na bileagan oir tha diofar bileagan ann a thathas a’ cleachdadh anns na deuchainnean sruthadh taobhach.
Gus tòiseachadh air an stiùireadh leasachaidh airson deuchainn sruthadh taobhach , tha e cudromach beachdachadh air beagan ghnìomhan mus tòisich thu air a’ phròiseas. An toiseach, tha e cudromach an cruth a thèid a thaghadh airson an deuchainn sruthadh taobhach a sgrùdadh, ge bith an e cruth farpaiseach no ceapaire a bhiodh ann. Gu bunaiteach, tha an stiùireadh leasachaidh airson an Deuchainn Sruthadh Taobhach an urra ri pròiseas leasachaidh an deuchainn. Is e a’ chiad cheum èiginneach agus as cudromaiche an deuchainn smachd a chomharrachadh a chuidicheas le bhith a’ comharrachadh an anailit targaid anns an sampall. Bheir an stiùireadh leasachaidh seo pròiseas leasachaidh LFA coitcheann oir tha pròiseas eadar-dhealaichte aig diofar dheuchainnean cuideachd.
Is e a’ chiad cheum don stiùireadh leasachaidh taghadh nan nanoparticles. Tha meud is cumadh nan nanoparticles ag atharrachadh. Tha diofar mheudan rim faighinn airson nan deuchainnean sruthadh taobhach. Tha na nanoparticles òir 40nm ann cuideachd le uachdar carbon no citrate a dh’ fhaodar a chleachdadh nas fhaide air adhart airson pròiseas adsorption phròtainean. Am measg nan nanoparticles eile a dh’ fhaodar a thaghadh airson leasachadh LFA tha òr carboxyl, nanoshells òir carboxyl, msaa. a bharrachd air an sin, tha probes eile ann leithid grìogagan ceallalòs, polystyrene dathte, agus probes fluorescent. Is e a’ phuing adhartach a tha an lùib taghadh nan nanoparticles òir carboxyl gu bheil feum air glè bheag de antibodies airson a’ phròiseas adsorption agus air sgàth nan nanoparticles sin tha ceangal air a chruthachadh a tha na cheangal amide seasmhach agus do-atharrachail. Ach, feumar cuimhneachadh gu bheil na feachdan a thig às a sin a lorgar eadar na nanoparticles agus na antibodies mar thoradh air an àrainneachd ceangail aca.
Is e an dàrna ceum Taghadh Antibody. Tha taghadh antibody na cheum èiginneach leis gu bheil coileanadh nan LFAn an urra ri dàimh nan antibodies, cineatachd, agus feartan steric eile. Cuideachd, tha ceangal antibodies cudromach airson na toraidhean a lorg. Is e feart cudromach eile fhad ‘s a thaghas tu na antibodies an dà sheòrsa dhiubh. Tha an dà sheòrsa antibodies monoclonal agus polyclonal. Tha antibodies monoclonal furasta an dèanamh ach tha cugallachd àrd aig antibodies polyclonal an taca ri monoclonal. Anns a ’cheum den phròiseas taghaidh antibody, tha dà cheum eile ann ie glanadh antibody, agus antibody loidhne smachd. Anns an taghadh antibody, is e an gas a thathar a ’moladh na antibodies a sgrionadh airson an adhbhar gum bu chòir deuchainn a dhèanamh orra ro-làimh. Faodar na antibodies a sgrìobadh agus a dhearbhadh le bhith a ’togail dreach fìor tòiseachaidh agus tùsail den assay sruthadh lateral a dh’ fhaodas a bhith ag obair mar inneal sampall deuchainn. Tha coileanadh nan antibodies eadar-dhealaichte ann an seòrsa eadar-dhealaichte de LFAn. Mar eisimpleir, ann an ELISA chan eil an cineòlas cho cudromach. Agus a ’bruidhinn mun assay sruthadh lateral, tha cumhachan sònraichte ann a dh’ fheumas antibodies a dhèanamh. An toiseach, bu chòir na antibodies a bhith gnìomhach eadhon às deidh dhaibh a bhith air an ceangal leis na nanoparticles agus cha bu chòir an ionracas structarail aca a bhith air an dochann ann an dòigh sam bith. Cuideachd, feumaidh comas a bhith aca sa bhad an ath-bhualadh aca a thoirt seachad nuair a thèid an sampall ath-uisgeachadh a-rithist leis an sampall. Tha an ùine brosnachaidh ann an seòrsan eile de Mheasaidhean nas fhaide an taca ris an Assay Flow Assay anns am feumar an ceangal ris an loidhne deuchainn a dhèanamh taobh a-staigh beagan ùine de dhiog.
Is e an treas pròiseas sa phròiseas seo membran nitrocellulose agus tha e na phàirt glè chudromach den LFA oir tha na loidhnichean deuchainn agus smachd aige. Tha na buill-bodhaig nitrocellulose cuideachd air na h-ath-bheachdan a tha ag obair gus na toraidhean a thoirt gu buil. Tha e ri fhaighinn ann an diofar mheudan, porosities, agus dealbhadh. Gu fìrinneach, tha an membran nitrocellulose an urra ri ùine sruthadh capillary. Le ùine sruthadh capillary, tha e a ’ciallachadh gum feum an ùine a dh’ fheumar airson an sampall sruthadh suas gu 4cm. Anns a ’cheum seo, tha ceum eile ann ris an canar stiall membran. Faodaidh am bufair anns a bheil pròtain sònraichte air a stialladh buaidh mhòr a thoirt air toraidhean deireannach assay sruthadh lateral sam bith. Ged a dh ’fhaodar mòran de phròtainean a sgaoileadh ann an 1x PBS, tha cuid dhiubh gu math mothachail do pH, dùmhlachd salainn, agus mar a tha stàball a’ tachairt airson an urrainnear trehalose ainmeachadh. Tha stialladh meur na cheum cudromach eile a thig leis a ’cheum seo. Anns a ’cheum seo, is e dealbhadh an deuchainn assay sruthadh lateral a bhith a’ stialladh an deuchainn agus a ’cumail smachd air na loidhnichean antibody a tha an làthair air an membran nitrocellulose. Is e beachdachadh cudromach sa cheum seo de membrane nitrocellulose far a bheilear ag ràdh nach cùm e an membran nitrocellulose ann an àite far nach eil taiseachd ann ach gu bheil e air a thiormachadh. Airson leasachadh an assay sruthadh lateral, bu chòir an teòthachd airson an membran nitrocellulose a bhith tais. Leis gu bheil diofar chruthan de mheasaidhean ann, ie cruth farpaiseach agus cruth ceapaire a tha glè chudromach cuideachd. Tha an dùmhlachd antibody eadar-dhealaichte anns an dà chruth airson cruth ceapaire tha an dùmhlachd antibody a thathar a ’moladh 1mg / mL airson dìreach antibodies loidhne deuchainn agus smachd agus faodaidh a’ chrìoch seo a bhith suas ri 0.5 gu 2 mg / mL. Anns a ’cheum leasachaidh nitrocellulose membrane agus leasachadh sruth lateral, is e ceum eile a tha air a ghabhail a-steach an ceum bacadh membran. Le bhith a ’dèanamh a’ cheum seo tha mòran bhuannachdan ann mar sruthadh leasaichte an t-sruthain, seasmhachd stiallan deuchainn, agus casg air a ’cheangal neo-shònraichte agus mar sin a’ toirt a-mach na fìor thoraidhean. Airson a ’mhòr-chuid den membran nitrocellulose anns an assay sruthadh lateral, tha fuasgladh seilbh ann a tha air a chur ris airson a bhith a’ dèanamh na buill hydrophilic.
Is e an ath cheum an ceap conjugate agus conjugate. Airson a bhith a ’leasachadh assay sruthadh lateral tha e cudromach a bhith a’ leasachadh paramadairean co-cheangail as fheàrr. Nuair a thèid conjugate ullachadh airson an assay sruthadh lateral tha e air a thoirt seachad agus air a thiormachadh air ceap conjugate. Airson a bhith a ’leasachadh co-chonnadh seasmhach de antibodies dh’ fhaodadh grunn cheumannan a bhith ann. Na ceumannan a tha an sàs ann a bhith a ’leasachadh èifeachdas co-leanailteach agus leasaichte den cho-bhanntachd. Anns a ’cheum seo, tha seasmhachd co-cheangail na cheum glè chudromach agus mar sin, feumar seasmhachd colloidal a bharrachadh fhad‘ s a thathar a ’dealbhadh an LFA. tha seasmhachd colloidal glè riatanach airson assay sruthadh fadalach agus mar sin fhad ‘s a thathar a’ dealbhadh agus a ’dèanamh an LFA as fheàrr tha seo an-còmhnaidh air a chumail fo bheachdachadh. Tha feartan optigeach air leth aig na nanoparticles òir aig a bheil pàirt deatamach ann an co-chòrdadh ann an LFA le cuideachadh bhon a bhios iad a ’gabhail a-steach agus a’ cuairteachadh an t-solais le mionaideachd agus èifeachdas. Bidh an eadar-obrachadh làidir eadar na nanoparticles agus solas a ’tachairt air sgàth na dealanan giùlain a tha an làthair air an uachdar meatailt a tha a’ leantainn gu oscillation cruinn nuair a bhios na dealanan a ’faighinn togail-inntinn leis an t-solas leis an aon tricead agus co-ionann. Às deidh co-chòrdadh soirbheachail tha cuid de bhuaidhean air na feartan optigeach oir thathas a ’cumail sùil air an atharrachadh anns a’ chlàr ath-dhealbhachaidh a dh ’fhaodar a lorg a-rithist ann an speactram UV-vis le eadar-dhealachadh na loidhne dhearg. Cuideachd airson làimhseachadh a ’phlug conjugation, dh’ fhaodadh diofar dhòighean a bhith ann. Tha cuid dhiubh bogaidh, no a ’frasadh gu co-ionnan le cuideachadh bho inneal-reic fèin-ghluasadach.
Às dèidh seo, bidh am pròiseas taghaidh pada sampall a’ tachairt. Is e seo a’ chiad phàirt den deuchainn sruthadh taobhach agus mar sin tha e riatanach sgrùdadh a dhèanamh air stuth a’ phada sampall agus ro-làimhseachadh a’ phada sampall airson a shruth agus a èifeachdas. Tha na padaichean sampall a thathas a’ cleachdadh airson nan deuchainnean sruthadh taobhach de dhiofar sheòrsaichean leithid snàithleach, cotan, synthetigeach, msaa. Chaidh a thoirt fa-near cuideachd gum faod cuid de na sampallan leithid fual, fuil, msaa. a bhith eadar-dhealaichte air sgàth mòran fhactaran eile a’ gabhail a-steach factaran bith-eòlasach, àm ithe, deoch a chaidh a ghabhail mus deach an sampall a chruinneachadh air an inneal deuchainn sruthadh taobhach, agus mòran eile. Airson a bhith a’ làimhseachadh a’ phada sampall agus ga leasachadh, faodar am bufair leasaichte a chleachdadh aig a bheil mòran bhuannachdan cuideachd. Fhad ‘s a tha an deuchainn sruthadh taobhach ga leasachadh, agus am pada sampall ga thaghadh, faodaidh am bufair leasaichte cuideachadh le bhith a’ leasachadh coileanadh an deuchainn le bhith a’ lughdachadh caochlaideachd an t-sampall a’ gabhail a-steach pròtain, pH, slaodachd, dùmhlachd salainn, msaa. Faodaidh e cuideachd an t-sruthadh agus cunbhalachd an deuchainn a leasachadh fhad ‘s a tha e ga leasachadh. Tha dearbhadh ann gu bheil bufairean làimhseachaidh air leth cuideachail ann a bhith a’ cumail suas an t-sruthadh agus an cunbhalachd, a’ gnàthachadh pH, ag obair mar riochdairean bacadh le bhith a’ cur nam pròtainean, salainn, surfactants còmhla leis an dùmhlachd iomchaidh de gach fear. Is e an comas gabhail a-steach an sònrachadh as cudromaiche den phasgan sampall a dh’fheumar a sgrùdadh oir tha sin ag innse mu mheud an t-sampall airson deuchainn.
Às deidh an ceap sampall a thaghadh thig an taghadh wick pad an ath rud. Bidh an ceap glacaidh a ’cuideachadh ann am pròiseas aslachaidh nan ath-bheachdan nach deach a thoirt a-steach le aon loidhne ie loidhne deuchainn agus loidhnichean smachd. Bidh an ceap glacaidh cuideachd a ’cur stad air sruthadh air ais den lionn a tha air a chleachdadh mar shampall. Tha beachd ann ged a tha thu a ’taghadh an stuth airson an wicking pad feumar sgrùdadh a dhèanamh air an stuth gus an inneal a shàbhaladh bho neo-chunbhalachd sam bith a dh’ fhaodadh leantainn gu cùisean agus is dòcha toraidhean meallta. A bharrachd air an àbhaist, chan eil an stuth tiugh no an ceap glacaidh nas fheàrr na an stuth nas taine. Tha an stuth nas taine nas fheàrr air coileanadh nas fheàrr agus mar as trice bidh an stuth le comas nas àirde aige uaireannan. Ach feumar a h-uile stuth a sgrùdadh airson na feartan aige agus dè cho freagarrach ‘s a tha iad airson leasachadh an assay sruthadh lateral. Airson meud agus stuth a ’phloc glacaidh a thaghadh feumar a chumail ann an co-thaobhadh ris a’ bhàillidh gum feum an comas gabhail a-steach a bhith nas àirde agus feumaidh meud bufair a bhith a ’ruith.
Anns an assay sruthadh lateral, tha an co-chruinneachadh deuchainn stiall cuideachd na cheum den stiùireadh leasachaidh aige. Ann an co-chruinneachadh deuchainn stiall, tha na LFAn air an cruinneachadh a rèir saothrachadh mòr no saothrachadh beag-sgèile. Airson cuid de sheòrsan de mheasaidhean sruthadh taobhach, is dòcha nach bi an leughadh cainneachdail riatanach ach bhiodh feum air cruth dipstick airson an t-seanadh deuchainn stiall ann an LFA a ruith. Tha casad aig a bheil deuchainn stiall taobh a-staigh aon de na ceumannan as riatanach agus deatamach gus an assay a choileanadh a ghabhas ath-riochdachadh agus cuideachd earbsach. Tha an dà shònrachadh a chaidh ainmeachadh roimhe seo air leth cudromach airson nan deuchainnean cainneachdail, gu sònraichte. Is e prìomh obair an tasgadan an cuideam a tha a dhìth a thoirt don t-sruthan. Tha seo airson dèanamh cinnteach gu bheil an sruth as fheàrr ann agus gu bheil an lionn cuideachd a ’dol tron t-seanadh aig an aon shruth. Bidh an tasgadan cuideachd a ’dèanamh cinnteach nach bi an leaghan a’ fuireach air na h-oirean agus dìreach a ’sruthadh air na padaichean.
Às deidh co-chruinneachadh deuchainn stiall, is e an ath cheum a bhith a ’ruith an assay. Tha diofar dhòighean ann airson a bhith a ’ruith a’ mheasaidh mar assay sgìreil anns an leaghan conjugate, làn mheasaidhean airson conjugate tiormaichte, agus am bufair ruith. Airson mion-sgrùdadh air an stiall, feumar fios a bhith agad a bheil an deuchainn càileachdail no cainneachdail agus feumar an dòigh sgrùdaidh ceart a thaghadh. Gus sgrùdadh a dhèanamh air a ’mheasaidh, faodar a dhèanamh an dàrna cuid tron t-sùil rùisgte anns am biodh toraidhean yes / no no le bhith a’ glacadh sealladh den loidhne deuchainn, faodar sganair flatbed no camara le solais fo smachd a chleachdadh. Is e an ceum mu dheireadh optimization an assay anns a bheil taghadh am paidhir antibody ceart, membran nitrocellulose, pad wick, pad adsorbent, agus a h-uile pàirt eile air an toirt a-steach.
Co-dhùnadh:
Tha an stiùireadh leasachaidh airson an Deuchainn Sruthadh Taobhach air a dhèanamh suas de naoi gu deich ceumannan a dh’ fheumar a leantainn gu mionaideach gus deuchainn sruthadh taobhach a chruthachadh.
iomraidhean
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0257/8237/files/BioReady_Lateral_Flow_Handbook.pdf