Quale potrebbe essere la ragione dei risultati falsi positivi nel dosaggio del flusso laterale?

Migliori flusso laterale saggio (LFA) è una piattaforma consolidata per i test point-of-care (POC) e il motivo è il basso costo e la facilità d'uso, gli LFA convenzionali producono risultati qualitativi o semi-quantitativi e richiedono l'uso di strumenti specializzati per il rilevamento quantitativo . Il saggio del flusso laterale (LFA) è una piattaforma cartacea per rilevare e quantificare analiti in miscele complesse. Il campione viene posizionato su un dispositivo di test e i risultati vengono visualizzati entro 5-30 minuti. A causa dei bassi costi di sviluppo e della facilità di produzione degli LFA, le loro applicazioni si sono estese a un'ampia gamma di campi che richiedono test rapidi.

Un campione liquido, come sangue, siero, plasma, urina, saliva o solidi solubilizzati, viene aggiunto direttamente al tampone di campionamento e utilizzato tramite il dispositivo di flusso laterale. Il tampone per campioni neutralizza il campione e filtra le particelle indesiderate come i globuli rossi. Il campione può quindi fluire liberamente verso il tampone coniugato, che contiene nanoparticelle altamente colorate o fluorescenti con un anticorpo sulla superficie. Queste nanoparticelle essiccate vengono rilasciate e si mescolano con il campione quando il liquido raggiunge il tampone coniugato. Se l'anticorpo riconosce degli analiti target nel campione, questi si legheranno all'anticorpo.

C'è stato un aumento della domanda di punto di cura più test diagnostici con linee di test estese che consentono il rilevamento rapido e simultaneo di più campioni point-of-care di analiti nella storia attuale. Tali saggi (potenzialmente un singolo LFA) dovrebbero essere semplici da eseguire senza l'assistenza di un laboratorio o di persone addestrate in analisi chimiche. Le zone svantaggiate sono candidati eccellenti perché sono poco costosi da produrre, semplici da usare e, soprattutto, ampiamente accettati dagli utenti e dalle autorità di regolamentazione.

Anche se il dosaggio del flusso laterale è un metodo utile e più utilizzato per i test, tuttavia ci sono alcuni deficit e problemi riscontrati nel dosaggio del flusso laterale e nei risultati, in particolare. Questa è una domanda frequente sul perché si verificano i risultati falsi positivi nel dosaggio del flusso laterale e ci sono ragioni diverse per questo a seconda del ramo della scienza. Tuttavia, il motivo per cui i risultati falsi positivi escono nel Lateral Flow Assay è discusso in dettaglio nella risposta seguente. Quando una linea di test è osservabile nell'assoluta mancanza dell'analita desiderato, un risultato falso positivo può essere causato da una varietà di fattori, tra cui il legame non specifico, la reattività crociata o gli anticorpi eterofili.

Per ottimizzare il dosaggio ed eliminare i risultati falsi positivi, è necessario identificare quale di questi fattori o combinazioni di fattori sta causando un risultato falso positivo. Il legame non specifico si verifica quando c'è un'interazione non specifica tra il coniugato anticorpo-nanoparticella e l'anticorpo sulla linea del test, indipendentemente dal fatto che l'analita target sia presente o meno. Spesso il legame non specifico può essere evitato semplicemente ottimizzando la procedura di coniugazione per una proteina specifica. L'ottimizzazione del carico di anticorpi/proteine ​​(troppo poco o troppo anticorpo può provocare un legame non specifico), il tempo di incubazione dell'anticorpo e il tampone di reazione sono tutti aspetti dell'ottimizzazione della coniugazione. Proteine, tensioattivi o polimeri possono essere utilizzati come agenti bloccanti in un componente della striscia reattiva (ad es. diluente del coniugato, pretrattamento del tampone del campione, pretrattamento del tampone del coniugato, tampone di corsa, ecc.). La reattività crociata differisce dal legame non specifico in quanto si verifica quando l'anticorpo si lega a un analita nel campione che NON è l'analita target. Questo è un problema più difficile da risolvere e di solito richiede la sostituzione di sistemi anticorpali che non reagiscono in modo incrociato con analiti indesiderati.

Un campione contenente anticorpi eterofili (anticorpi endogeni che legano gli anticorpi del test) possono produrre un risultato falso positivo. Diversi tipi di anticorpi eterofili possono finire per causare reticolazione tra l'anticorpo coniugato alla nanoparticella e l'anticorpo sulla linea del test, anche quando l'analita bersaglio non è presente. Se il risultato falso positivo mostra la stessa intensità del segnale anche dopo la diluizione del campione, piuttosto che una diminuzione lineare dell'intensità del segnale, potrebbe essere dovuto ad anticorpi eterofili. Gli anticorpi umani in un campione che interagiscono con gli anticorpi del test per produrre risultati falsi positivi o falsi negativi sono indicati come anticorpi eterofili. L'anticorpo eterofilo può svilupparsi in un paziente a seguito di esposizione a specifici animali o prodotti animali, infezione con agenti batterici o virali o in modo non specifico. Un test con risultato falso positivo può verificarsi per diversi punti di una tecnica di test scadente da parte dello screening (ad es., striscio spesso su una scheda Haemoccult) e una lettura del test non valida. Una lettura ritardata può anche portare a un risultato falso positivo, specialmente quando si utilizza un test di agglutinazione al lattice. Un risultato falso positivo può anche essere causato da una fisiologica perdita di sangue in un soggetto che non rientra nel range di normalità.

Risultati falsi positivi possono verificarsi a causa di interruzioni dell'omeostasi (p. es., riparazione incompleta dell'escissione, arresto del ciclo cellulare, infiammazione) che possono verificarsi prima membrane cellulari sono compromessi e la necrosi/apoptosi è rilevabile dall'istopatologia. Queste conseguenze possono aumentare la migrazione del DNA nel sito di contatto così come perifericamente in altri tessuti poiché il tessuto risponde al danno cellulare e la risposta infiammatoria sistemica progredisce, a seconda della concentrazione della dose e della frequenza di somministrazione.

Conclusione

Migliori saggio del flusso laterale È semplice, di facile accesso ed economico, ma a causa di diverse ragioni sopra menzionate, i risultati possono talvolta non essere attendibili. Le proprietà distintive ed eccezionali degli LFA hanno contribuito al rilevamento di biomarcatori di malattie e agenti infettivi in ​​medicina, agricoltura, sicurezza alimentare e sicurezza ambientale. Sebbene il principio del metodo sia rimasto invariato per decenni, le tecniche LFA sono state costantemente migliorate, con conseguente aumento della sensibilità e della riproducibilità, nonché del rilevamento simultaneo di più analiti. È importante sottolineare che questi test possono ora essere eseguiti al di fuori del laboratorio, il che offre vantaggi significativi per l'uso nei paesi in via di sviluppo e presso il punto di cura, sia sul campo che in contesti clinici più convenzionali. Sebbene il test a flusso laterale possa mostrare risultati falsi positivi e viceversa, altri metodi possono essere provati e testati per rassicurazione.

Referenze
https://www.clinisciences.com/en/read/serological-tests-in-mycology-1190/lateral-flow-assay-lfa-2095.html
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0165993616300668
https://nanocomposix.com/pages/introduction-to-lateral-flow-rapid-test-diagnostics
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4986465/
https://www.abingdonhealth.com/services/what-is-lateral-flow-immunoassay/