Bočný prietok test je zariadenie, ktoré sa používa na rýchle testovanie doma a tiež na klinické testovanie. Sú to najspoľahlivejšie a najpresnejšie zariadenia, ktoré sa používajú takmer v každej rozvinutej a rozvojovej krajine. Tiež, test bočného prietoku Sprievodca vývojom obsahuje takmer 10 krokov, ktoré určujú proces vývoja testu laterálneho toku. Zvyčajne Testy laterálneho toku mať podložku na vzorky, vankúšik s konjugátom, nitrocelulózovú membránu, adsorpčný vankúš so štítkom a pufer. Na štítkoch však môžu nastať určité zmeny, pretože existujú rôzne štítky, ktoré sa používajú v testoch laterálneho toku.
Ak chcete spustiť sprievodca vývojom testu laterálneho toku, je dôležité zvážiť niekoľko akcií pred začatím procesu. V prvom rade je dôležité analyzovať formát, ktorý sa má zvoliť pre test laterálneho toku, či už by to bol konkurenčný alebo sendvičový formát. Sprievodca vývojom testu laterálneho toku je v zásade závislý od procesu vývoja testu. Prvým kritickým a najdôležitejším krokom je identifikácia kontrolného testu, ktorý pomôže identifikovať cieľový analyt vo vzorke. Tento vývojový sprievodca poskytne všeobecný proces vývoja LFA, pretože rôzne testy majú tiež odlišný proces.
Prvým krokom k sprievodca vývojom je výber nanočastíc. Výber nanočastíc sa líši veľkosťou a tvarom. Pre testy bočného prietoku sú k dispozícii rôzne veľkosti. Tiež prichádzajú 40nm zlaté nanočastice s povrchom z uhlíka alebo citrátu, ktoré je možné ďalej použiť na adsorpčný proces bielkovín. Ostatné nanočastice, ktoré je možné vybrať na vývoj LFA, zahrnujú karboxylové zlato, nanočastice karboxylového zlata atď., Okrem toho, že existujú ďalšie sondy, ako sú celulózové guľôčky, farbený polystyrén a fluorescenčné sondy. Plusovým bodom výberu nanočastíc karboxylového zlata je to, že na adsorpčný proces je potrebných veľmi málo protilátok a v dôsledku týchto nanočastíc sa vytvorí väzba, ktorá je stabilnou a nevratnou amidovou väzbou. Je však potrebné mať na pamäti, že výsledné sily, ktoré sa nachádzajú medzi nanočasticami a protilátkami, sú spôsobené ich spojovacím prostredím.
Druhým krokom je výber protilátky. Selekcia protilátok je kritickým krokom, pretože výkonnosť LFA závisí od afinity protilátok, kinetiky a ďalších sterických vlastností. Väzba protilátok je tiež dôležitá pre detekciu výsledkov. Ďalším dôležitým faktorom pri výbere protilátok sú ich dva typy. Dva typy protilátok sú monoklonálne a polyklonálne. Monoklonálne protilátky sa ľahko vyrábajú, zatiaľ čo polyklonálne protilátky majú relatívne vysokú citlivosť v porovnaní s monoklonálnymi. V kroku procesu selekcie protilátky sú ďalšie dva kroky, tj. Čistenie protilátky a protilátka kontrolnej línie. Pri výbere protilátok je navrhovaným kmeňom skríning protilátok z dôvodu, že by mali byť vopred testované. Protilátky je možné skrínovať a testovať vytvorením veľmi predbežnej a počiatočnej verzie testu laterálneho toku, ktorý môže fungovať ako zariadenie na testovanie vzoriek. Účinnosť protilátok je v rôznych druhoch LFA odlišná. Napríklad pri teste ELISA kinetika nemá veľký význam. A keď už hovoríme o teste laterálneho toku, existujú určité podmienky, ktoré protilátky musia zvládnuť. V prvom rade by mali byť protilátky aktívne aj potom, čo boli konjugované s nanočasticami, a ich štrukturálna integrita by nemala byť žiadnym spôsobom poškodená. Tiež musia mať schopnosť okamžite reagovať, keď sa vzorka znova rehydratuje. Inkubačný čas v iných druhoch testov je dlhší v porovnaní s testom laterálneho toku, v ktorom sa väzba na testovaciu líniu musí vykonať v časovom rozmedzí niekoľkých sekúnd.
Tretím procesom v tomto procese je nitrocelulózová membrána a je to veľmi dôležitá časť LFA, pretože má testovacie a kontrolné čiary. Nitrocelulózová membrána má tiež činidlá, ktoré slúžia na dosiahnutie výsledkov. Je k dispozícii v rôznych veľkostiach, pórovitosti a prevedení. Nitrocelulózová membrána je v skutočnosti závislá od času kapilárneho toku. Pod kapilárnym prietokovým časom to znamená, že čas potrebný na prietok vzorky je až 4 cm. V tomto kroku je ďalší krok, ktorý sa nazýva odizolovanie membrány. Pufr, v ktorom je pruhovaný špecifický proteín, môže mať významný vplyv na konečné výsledky akéhokoľvek testu laterálneho toku. Napriek tomu, že mnohé proteíny je možné rozpustiť v 1x PBS, niektoré sú extrémne citlivé na pH, koncentráciu soli a výskyt stabilizátora, pre ktorý je možné pomenovať trehalózu. Odizolovanie membrány je ďalším dôležitým krokom, ktorý s týmto krokom súvisí. V tomto kroku je cieľom testu bočného prietoku testovanie na páse a kontrola línií protilátky, ktoré sú prítomné na nitrocelulózovej membráne. Dôležitým aspektom v tomto kroku je nitrocelulózová membrána, kde sa hovorí, že nedrží nitrocelulózovú membránu na mieste, kde nie je žiadna vlhkosť, ale skôr je všetko vysušené. Na vývoj testu laterálneho toku by mala byť teplota nitrocelulózovej membrány vlhká. Pretože existujú rôzne formáty testov, tj. Konkurenčný formát a sendvičový formát, ktoré sú tiež veľmi dôležité. Koncentrácia protilátky sa líši v oboch formátoch pre sendvičový formát, odporúčaná koncentrácia protilátky je 1 mg/ml iba pre protilátky testovaných a kontrolných línií a tento limit sa môže pohybovať až do 0.5 až 2 mg/ml. V kroku kroku nitrocelulózovej membrány a sprievodcovi vývojom laterálneho toku je ďalším zahrnutým krokom blokovanie membrány. Vykonanie tohto kroku má mnoho výhod, ako je zlepšený tok tekutiny, stabilita testovacích prúžkov a blokovanie nešpecifického viazania, čím poskytujú skutočné výsledky. Na väčšinu nitrocelulózovej membrány v teste laterálneho prietoku existuje patentovaný roztok, ktorý je pridaný do hydrofilnej membrány.
Ďalším krokom je konjugát a konjugátová podložka. Na vývoj testu laterálneho prietoku je dôležité vyvinúť optimalizačné konjugačné parametre. Keď je konjugát pripravený na test laterálneho toku, je rozdelený a sušený na konjugátovom tampóne. Na vyvinutie stabilizovanej konjugácie protilátok môže existovať niekoľko krokov. Kroky zahrnuté vo vývoji súdržnej a zvýšenej účinnosti konjugácie. V tomto kroku je konjugačná stabilita veľmi dôležitým krokom, a preto pri navrhovaní LFA musí byť koloidná stabilita optimalizovaná. koloidná stabilita je veľmi dôležitá pre test laterálneho toku, a preto pri navrhovaní a optimalizácii LFA je toto vždy brané do úvahy. Nanočastice zlata, ktoré hrajú kľúčovú úlohu v konjugácii v LFA, majú veľmi jedinečné optické vlastnosti, pomocou ktorých absorbujú a rozptyľujú svetlo s presnosťou a účinnosťou. K silnej interakcii medzi nanočasticami a svetlom dochádza vďaka vodivým elektrónom, ktoré sú prítomné na povrchu kovu, čo má za následok kolektívnu osciláciu, keď sa elektróny vzrušujú svetlom s rovnakou a rovnakou frekvenciou. Potom, čo dôjde k úspešnej konjugácii, existujú určité účinky na optické charakteristiky, pretože zmena je pozorovaná v indexe lomu, ktorý je možné ďalej vysledovať v spektrách ultrafialového žiarenia rozlíšením červenej čiary. Tiež na liečbu konjugačného vankúšika môžu existovať rôzne metódy. Niektoré z nich sú ponorené alebo rovnomerne striekané pomocou automatického dávkovača.
Potom nasleduje proces výberu vzorkovnice. Toto je prvá časť bočný tok test, preto je nevyhnutné skontrolovať materiál podložky na vzorky a predbežnú úpravu vzorky podložky na jej tok a účinnosť. Vložky na vzorky používané na testy priečneho toku sú rôznych druhov, ako sú vlákna, bavlna, syntetika, atď. Tiež bolo pozorované, že niektoré vzorky ako moč, krv atď. Sa môžu líšiť v dôsledku mnohých ďalších faktorov, ktoré zahŕňajú biologické faktory, načasovanie stravovania, nápoj odobratý pred odberom vzorky na zariadení na testovanie laterálneho prietoku a mnoho ďalších. Na ošetrenie vzorkovacej podložky a jej optimalizáciu je možné použiť optimalizovaný pufer, ktorý má tiež mnoho výhod. Pri vývoji testu laterálneho prietoku a výbere podložky na vzorky môže ootmizovaný pufer pomôcť zlepšiť výkonnosť testu znížením variability vzorky, ktorá zahŕňa proteín, pH, viskozitu, koncentráciu soli atď. tok a konzistencia testu počas jeho vývoja. Dokázalo sa, že liečebné pufre sú mimoriadne nápomocné pri udržiavaní toku a konzistencie, normalizácii pH, pričom pôsobia ako blokovacie činidlá zlúčením proteínov, solí, povrchovo aktívnych látok s vhodnou koncentráciou každého z nich. Najdôležitejšou špecifikáciou vzorky na kontrolu je absorpčná kapacita, pretože tá hovorí o objeme vzorky na test.
Potom, čo je vybraný vankúšik so vzorkou, príde na rad výber knôtu. Vsakovací vankúšik pomáha pri adsorpčnom procese reagencií, ktoré neboli absorbované ani jednou líniou, tj. Testovacou linkou, ani kontrolnou linkou. Presakovací vankúšik tiež zastaví spätný tok tekutiny, ktorá sa používa ako vzorka. Navrhuje sa, aby bol pri výbere materiálu pre vsakovací materiál materiál skontrolovaný, aby sa zariadenie zachránilo pred akýmikoľvek nezrovnalosťami, ktoré môžu viesť k problémom a možno k falošným výsledkom. Okrem normálneho stavu nie je hrubý materiál alebo vsakovací vankúš lepší ako tenší materiál. Tenší materiál má lepšie vlastnosti a zvyčajne má niekedy materiál s vyššou kapacitou. Každý materiál však musí byť skontrolovaný z hľadiska vlastností a vhodnosti pre vývoj testu laterálneho toku. Na výber veľkosti a materiálu nasakovacej podložky je potrebné, aby bola v súlade s faktorom, že absorpčná kapacita musí byť vyššia a musí byť spustený objem pufra.
V bočnom prietokovom teste je zostava testovacieho pásu tiež krokom jeho sprievodcu vývojom. Pri montáži na testovanie prúžkov sú LFA montované na základe veľkej výroby alebo výroby v malom rozsahu. Pri niektorých typoch skúšok laterálneho prietoku nemusí byť kvantitatívne odčítanie požiadavkou, ale na spustenie testovacej zostavy pásu v LFA by bol potrebný formát mierky. Existuje kazeta, v ktorej je test s prúžkami vo vnútri, je jedným z najdôležitejších a najdôležitejších krokov na dosiahnutie reprodukovateľného a spoľahlivého testu. Dve vyššie uvedené špecifikácie sú obzvlášť dôležité pre kvantitatívne testy. Hlavnou úlohou kazety je zabezpečiť požadovaný tlak tekutiny. To má zaistiť optimálny prietok a tekutina tiež prechádza zostavou pri rovnakom prietoku. Kazeta tiež zaisťuje, aby kvapalina nezostala na okrajoch výsledkami a aby tiekla iba na podložkách.
Po montáži testovacieho prúžku je ďalším krokom spustenie testu. Na uskutočnenie testu existujú rôzne techniky, ako napríklad okresný test v kvapalnom konjugáte, úplné testy na sušený konjugát a bežiaci pufer. Na analýzu prúžku musí byť známe, že je potrebné zvoliť kvalitatívny alebo kvantitatívny test a zvoliť správnu analytickú metódu. Na analýzu testu je možné vykonať buď voľným okom, v ktorom by boli výsledky áno/nie, alebo zachytením dojmu z testovacej čiary, je možné použiť plochý skener alebo kameru s riadeným osvetlením. Posledným krokom je optimalizácia testu, v ktorom je zahrnutý výber správneho páru protilátok, nitrocelulózovej membrány, knôtu, adsorpčného vankúša a všetkých ostatných častí.
záver:
sprievodca vývojom testu laterálneho toku je poskytnutých deväť až desať krokov, ktoré je potrebné dôsledne dodržať pri vytváraní testu laterálneho toku.
Referencie
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0257/8237/files/BioReady_Lateral_Flow_Handbook.pdf
