Што ги тера антителата да останат на анализата на страничниот проток на мембраната на нитроцелулозата?
Нитроцелулозната мембрана во анализата на латерален проток доаѓа по примерокот и конјугираната подлога. Нитроцелулозната мембрана се нарекува и супстратна мембрана и е еден од најважните и најчувствителните делови кон резултатите од тестот спроведен на анализата на латерален проток . Во анализата на латерален проток, може да се користат различни материјали како што се целулозен ацетат, поливинилиден флуорид (PVDF), модифициран најлон и полиетерсулфон (PES) итн. Во нитроцелулозната мембрана, има различна големина на порите, порозност, дебелина и хемиски третман . Нитроцелулозните мембрани немаат еднаква распределба на порите, затоа времето на капиларниот проток е попожелно. Пред да се премине понатаму во размислувањето, важно е да се знае за капиларниот проток. Во основа, времето на капиларниот проток се мери во секунди или сантиметри и тоа е вкупното време што му било потребно на примерокот целосно да се наполни во тест лентата или во уредот за анализа на латерален проток.
Нитроцелулозната мембрана делува како тело носител на антителата на уредот за анализа на страничен проток. Тие исто така се користат за скрининг на различни процеси и типови на антитела, односно моноклонали, а тоа се случува како резултат на модификација на ензимоимуноанализа.
На нитроцелулозната мембрана , антителата остануваат и се конјугираат со биолошките честички, или латекс или златни честички. На антителата не им е дозволено да се движат и се имобилизирани на нитроцелулозната мембрана од различни причини. Бидејќи постојат тест линии и контролни линии на анализата на страничен проток, антителата се заглавени помеѓу овие две линии. Со оглед на тест линијата, таа се користи за врзување на протеинот од примерокот, додека контролната линија ги содржи специфичните антитела за видот кои се користат за понатамошно откривање на антителата во примерокот. Друга причина зошто антителата остануваат на нитроцелулозната мембрана е големината на порите на задната фолија. Непорозната задна фолија на нитроцелулозната мембрана не дозволува антителата да се лизгаат, туку тие се цврсто држени и на тој начин остануваат на мембраната. Ова исто така помага во намалување на варијабилноста.
Други важни фактори што ги прават антителата да останат на нитроцелулозната мембрана се изборот на разредувач на антитела, методот на сушење, концентрацијата на антителата за заробување и брзината на дозирање на реагенсот. Потребно е правилно сушење за да се осигури дека антителата за заробување се залепени на мембраната; сепак, на мембраните со задна страна им треба значително повеќе време за сушење во споредба со мембраните без задна страна. Освен сложеноста, загриженоста на корисниците, подготовката на примерокот, одржувањето, репродуктивноста и лесното толкување на резултатите, секогаш треба да се осигура дека е потребно чувствително откривање на одредени параметри. Некои од овие стандарди, како што се толкувањето и чувствителноста на резултатите, се силно поврзани со имобилизацијата на агенсите за детекција и просторното задржување со параметрите на областа за тестирање.
Друг пристап што помага да се направат антителата да останат на нитроцелулозната мембрана е ковалентната приврзаност на антителата кон мембраната на анализата за страничен проток. Исто така, нековалентната имобилизација на антителата на нитроцелулозната мембрана на ЛФА навестува многу силен капацитет на нитроцелулозните мембрани во врзување на антитела врз неа. Како што веќе беше споменато, во анализата за страничен тек има честички чувствителни и клучни за тестирање на примерокот. Поврзувајќи го ова со колоидните златни честички, тие се докажаа дека ги прават антигените да останат на целулозната мембрана. Во овој процес, првиот чекор е пасивната адсорпција на антителото потребно на површината на наночестичката од злато колоидно. Ова е едно од најпредизвикувачките во анализата за страничен проток. За таа цел, создадени се честичките за конјугација кои лесно ги прават антителата, молекулите и другите елементи да останат на нитроцелулозната мембрана.
Ова исто така нуди лесно прицврстување и обложување на антителата на површината, вклучително и други аналити, па дури и биомолекули. Освен тоа, латексните зрнца во анализата за страничен проток се исто така корисни за да се направат антителата да останат на нитроцелулозната мембрана. Исто така, пасивната конјугација, исто така, може да помогне да се направат антитела да останат на нитроцелузната мембрана на тестот за анализа на страничен проток. Иако овие процеси и причини можат да ги натераат антителата да останат на нитроцелулозната мембрана на анализата за страничен проток, тие одземаат многу време и многу долги процеси Не само ова, туку бара голема опрема и други работи, што го прават бурно и многу скапо. Исто така, некои причини бараат активна оптимизација на pH вредноста и ова е обемна работа, затоа, нови методологии и процеси се вградени во уредот за анализа на страничен тек, што доведува до употреба на други методи. Неколку антитела се специјално имобилизирани на нитроцелулоза со физичка апсорпција. Со длабоки корени во истражувањето, антителата исто така можат да останат на нитроцелулозната мембрана поради специфичната хидрофобна и диполарна интеракција помеѓу протеинските домени и нитроцелулоза, што резултира со зачувување на ориентацијата на антителата.
Заклучок
Како заклучок и сумирање во светлината на горенаведениот опис, нитроцелулозата е важен дел од анализата на латерален проток и уредот што се користи за тестирање. Еден од најважните и најважните фактори што ја одредуваат анализата на латерален проток и неговата чувствителност е мембраната на подлогата или нитоцелулозната мембрана . Тестните и контролните линии се повлекуваат преку мембраната за да се обезбеди добро врзување и заробување на антителата. Неспецифичната адсорпција на тестните и контролните линии може да влијае на чувствителноста на резултатите, што резултира со лажни вредности на резултатите. Бидејќи нитроцелулозата е еден од деловите на анализата на латерален проток од кој се пренесува примерокот, од примерокот, антителата и антигенските делови и од примерокот и од уредот се конјугираат едни со други и преминуваат на следниот дел. Оттаму, примерокот тече до нитроцелулозната мембрана, која последователно ги прима антителата и антигените потребни за тестирањето. Својствата и причините што го прават антигенот да остане на нитроцелулозната мембрана се опишани детално погоре, со што се опфаќа темата на трудот.
Референци
https://www.creative-diagnostics.com/Immunochromatography-guide.htm
https://fnkprddata.blob.core.windows.net/domestic/download/pdf/IBS_A_guide_to_lateral_flow_immunoassays.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6350463/
https://www.bakerlab.org/wp-content/uploads/2015/12/Holstien_Anal_Bioanal_Chem_2015.pdf
https://www.nature.com/articles/s41598-021-87072-7
https://www.researchgate.net/topic/Nitrocellulose