Што ги тера антителата да останат на анализата на страничниот проток на мембраната на нитроцелулозата?
Нитроцелулозна мембрана во Латерален проток Анализата доаѓа по примерокот и конјугираната подлога. Нитроцелулозната мембрана се нарекува и супстратна мембрана и таа е една од најважните и најчувствителните делови кон резултатите од тестот спроведен на Анализа за страничен проток. Во анализата за страничен проток, може да се користат различни материјали како што се целулоза ацетат, поливинилиден флуорид (PVDF), полнење модифициран најлон и полиетерсулфон (PES), итн. Во нитроцелулозната мембрана, има различна големина на пори, порозност, дебелина , и хемиски третман. Нитроцелулозните мембрани немаат еднаква распределба на порите, затоа времето на капиларно проток е попосакувано. Пред да преминете понатаму во размислување, важно е да знаете за капиларниот проток. Во основа, времето на капиларен проток се мери во секунди или сантиметри и тоа е вкупното време што примерокот го зеде за да биде целосно пополнет во тест -лентата или во уредот за анализа на страничен проток.
Нитроцелулозната мембрана делува како тело носител на антителата на уредот за анализа на страничен проток. Тие исто така се користат за скрининг на различни процеси и типови на антитела, односно моноклонали, а тоа се случува како резултат на модификација на ензимоимуноанализа.
На нитроцелулозна мембрана, антителата остануваат и се конјугираат со биолошките честички или латекс или златни честички. Антителата не смеат да се движат и се имобилизирани на нитроцелулозната мембрана поради различни причини. Бидејќи постојат тест линии и контролни линии на анализата за страничен проток, антителата се заглавени помеѓу овие две линии. Со оглед на линијата за тестирање, се користи за врзување на протеинот-примерок, додека контролната линија има антитела специфични за видот што се користат за понатамошно откривање на антитела во примерокот. Друга причина што антителата остануваат на нитроцелулозната мембрана е големината на порите на задниот филм. Непорозниот заднински филм на нитроцелулозната мембрана не дозволува антителата да се лизгаат, туку тие се цврсто обработени и така остануваат на мембраната. Ова исто така помага да се намали варијабилноста.
Други важни фактори што ги прават антителата да останат на нитроцелулозната мембрана се изборот на разредувач на антитела, методот на сушење, концентрацијата на антителата за заробување и брзината на дозирање на реагенсот. Потребно е правилно сушење за да се осигури дека антителата за заробување се залепени на мембраната; сепак, на мембраните со задна страна им треба значително повеќе време за сушење во споредба со мембраните без задна страна. Освен сложеноста, загриженоста на корисниците, подготовката на примерокот, одржувањето, репродуктивноста и лесното толкување на резултатите, секогаш треба да се осигура дека е потребно чувствително откривање на одредени параметри. Некои од овие стандарди, како што се толкувањето и чувствителноста на резултатите, се силно поврзани со имобилизацијата на агенсите за детекција и просторното задржување со параметрите на областа за тестирање.
Друг пристап што помага да се направат антителата да останат на нитроцелулозната мембрана е ковалентната приврзаност на антителата кон мембраната на анализата за страничен проток. Исто така, нековалентната имобилизација на антителата на нитроцелулозната мембрана на ЛФА навестува многу силен капацитет на нитроцелулозните мембрани во врзување на антитела врз неа. Како што веќе беше споменато, во анализата за страничен тек има честички чувствителни и клучни за тестирање на примерокот. Поврзувајќи го ова со колоидните златни честички, тие се докажаа дека ги прават антигените да останат на целулозната мембрана. Во овој процес, првиот чекор е пасивната адсорпција на антителото потребно на површината на наночестичката од злато колоидно. Ова е едно од најпредизвикувачките во анализата за страничен проток. За таа цел, создадени се честичките за конјугација кои лесно ги прават антителата, молекулите и другите елементи да останат на нитроцелулозната мембрана.
Ова исто така нуди лесно прицврстување и обложување на антителата на површината, вклучително и други аналити, па дури и биомолекули. Освен тоа, латексните зрнца во анализата за страничен проток се исто така корисни за да се направат антителата да останат на нитроцелулозната мембрана. Исто така, пасивната конјугација, исто така, може да помогне да се направат антитела да останат на нитроцелузната мембрана на тестот за анализа на страничен проток. Иако овие процеси и причини можат да ги натераат антителата да останат на нитроцелулозната мембрана на анализата за страничен проток, тие одземаат многу време и многу долги процеси Не само ова, туку бара голема опрема и други работи, што го прават бурно и многу скапо. Исто така, некои причини бараат активна оптимизација на pH вредноста и ова е обемна работа, затоа, нови методологии и процеси се вградени во уредот за анализа на страничен тек, што доведува до употреба на други методи. Неколку антитела се специјално имобилизирани на нитроцелулоза со физичка апсорпција. Со длабоки корени во истражувањето, антителата исто така можат да останат на нитроцелулозната мембрана поради специфичната хидрофобна и диполарна интеракција помеѓу протеинските домени и нитроцелулоза, што резултира со зачувување на ориентацијата на антителата.
Заклучок
За да се заклучи и сумира со оглед на горенаведениот опис, нитроцелулозата е важен дел од анализата за страничен проток и уредот што се користи за тестирање. Еден од најважните и најважните фактори кои го одредуваат тестот за страничен проток и неговата чувствителност е мембраната на подлогата или Нитроцелулозна мембрана. Тестот и контролните линии се исцртуваат преку мембраната за да се обезбеди добро врзување и фаќање на антителата. Неспецифичната адсорпција на тест и контролните линии може да влијае на чувствителноста на резултатите, што резултира со лажни вредности на резултатот. Бидејќи нитроцелулозата е еден од деловите на анализата за страничен проток од кој се пренесува примерокот. Од примерокот, антителата и антигенските делови и на примерокот и на уредот се конјугираат едни со други и преминуваат на следниот дел. Оттаму, примерокот тече кон нитроцелулозната мембрана што следствено ги зема антителата и антигените потребни за тестирање. Својствата и причините што го прават престојот на антигенот на мембраната на нитроцелулоза се опишани погоре во детали, со што се опфаќа предметот на трудот.
Референци
https://www.creative-diagnostics.com/Immunochromatography-guide.htm
https://fnkprddata.blob.core.windows.net/domestic/download/pdf/IBS_A_guide_to_lateral_flow_immunoassays.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6350463/
https://www.bakerlab.org/wp-content/uploads/2015/12/Holstien_Anal_Bioanal_Chem_2015.pdf
https://www.nature.com/articles/s41598-021-87072-7
https://www.researchgate.net/topic/Nitrocellulose